生命科学仪器
生命科學儀器
생명과학의기
LIFE SCIENCES INSTRUMENT
2009年
12期
30-34
,共5页
拮抗细菌%生理生化特性%16SrRNA基因%菌种鉴定
拮抗細菌%生理生化特性%16SrRNA基因%菌種鑒定
길항세균%생리생화특성%16SrRNA기인%균충감정
Y-21是从山东省淄博市蔬菜温室中分离到的一株细菌,通过室内平板对峙试验,对番茄灰霉病菌具有较强的拮抗性.本研究通过形态观察、生理生化反应和分子生物学方法对这株细菌进行系统鉴定.显微镜观察菌株形态为杆状;有芽孢;革兰氏染色呈阳性.采用经典的基因组提取方法提取基因组DNA,以其为模板,利用引物63F、1494R扩增16S rRNA基因,回收16SrRNA基因的PCR产物并与T载体连接,通过热激法将重组质粒转入大肠杆菌感受态细胞,利用蓝白斑筛选,挑出白斑,提取质粒,通过蓝白斑质粒的电泳图比对和质粒的PCR检测确定阳性克隆,将阳性克隆菌株送样测序.将测序结果输入BLAST进行比对,发现Y-21属于假单胞菌属,然后对其构建系统发育树.
Y-21是從山東省淄博市蔬菜溫室中分離到的一株細菌,通過室內平闆對峙試驗,對番茄灰黴病菌具有較彊的拮抗性.本研究通過形態觀察、生理生化反應和分子生物學方法對這株細菌進行繫統鑒定.顯微鏡觀察菌株形態為桿狀;有芽孢;革蘭氏染色呈暘性.採用經典的基因組提取方法提取基因組DNA,以其為模闆,利用引物63F、1494R擴增16S rRNA基因,迴收16SrRNA基因的PCR產物併與T載體連接,通過熱激法將重組質粒轉入大腸桿菌感受態細胞,利用藍白斑篩選,挑齣白斑,提取質粒,通過藍白斑質粒的電泳圖比對和質粒的PCR檢測確定暘性剋隆,將暘性剋隆菌株送樣測序.將測序結果輸入BLAST進行比對,髮現Y-21屬于假單胞菌屬,然後對其構建繫統髮育樹.
Y-21시종산동성치박시소채온실중분리도적일주세균,통과실내평판대치시험,대번가회매병균구유교강적길항성.본연구통과형태관찰、생리생화반응화분자생물학방법대저주세균진행계통감정.현미경관찰균주형태위간상;유아포;혁란씨염색정양성.채용경전적기인조제취방법제취기인조DNA,이기위모판,이용인물63F、1494R확증16S rRNA기인,회수16SrRNA기인적PCR산물병여T재체련접,통과열격법장중조질립전입대장간균감수태세포,이용람백반사선,도출백반,제취질립,통과람백반질립적전영도비대화질립적PCR검측학정양성극륭,장양성극륭균주송양측서.장측서결과수입BLAST진행비대,발현Y-21속우가단포균속,연후대기구건계통발육수.
