基因组学与应用生物学
基因組學與應用生物學
기인조학여응용생물학
GENOMICS AND APPLIED BIOLOGY
2009年
6期
1056-1062
,共7页
链格孢%根癌农杆菌%ATMT%双元载体
鏈格孢%根癌農桿菌%ATMT%雙元載體
련격포%근암농간균%ATMT%쌍원재체
Alternaria alternata (Fries) Keissler%Agrobacterium tumefaciens%ATMT%Binary vector
本文利用来自质粒pUCATPH的构巢曲霉色氨酸合成基因trpC的启动子(PtrpC)、终止子(Ttrpc)和潮霉素磷酸转移酶抗性基因(hph)以及植物表达载体pROK Ⅱ成功构建了适用于丝状真菌的根癌农杆菌介导转化的双元载体pROKIIHPH,并转化根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens LBA4404,建立了根癌农杆菌LBA4404介导的链格孢Alternaria alternata分生孢子转化体系;再从乙酰丁香酮(AS)浓度、不同的共培养时间、受体菌分生孢子浓度和农杆菌菌液浓度对A.alternata转化效率的影响对体系进行优化.结果确定了根癌农杆菌菌液体积为200 mL(OD_(600)=0.15),A.alternata分生孢子浓度为10~6个/mL,在A.tumefaciens的预培养时期以及与A.alternata共培养时期分别加入200 μmol/LAS,共培养时间48 h,转化率达120～200个/10~5分生孢子.在所筛选的约800个转化子中获得了1株毒性明显低于野生菌sd1的弱毒突变株t108,通过PCR验证推测其毒力降低可能由于T-DNA插入阻断了基因的表达.该实验结果为与突变相关基因的研究以及弱毒株t108的进一步研究和利用提供了实验材料,也为深入研究链格孢sd1菌株的基因功能奠定了基础.
本文利用來自質粒pUCATPH的構巢麯黴色氨痠閤成基因trpC的啟動子(PtrpC)、終止子(Ttrpc)和潮黴素燐痠轉移酶抗性基因(hph)以及植物錶達載體pROK Ⅱ成功構建瞭適用于絲狀真菌的根癌農桿菌介導轉化的雙元載體pROKIIHPH,併轉化根癌農桿菌Agrobacterium tumefaciens LBA4404,建立瞭根癌農桿菌LBA4404介導的鏈格孢Alternaria alternata分生孢子轉化體繫;再從乙酰丁香酮(AS)濃度、不同的共培養時間、受體菌分生孢子濃度和農桿菌菌液濃度對A.alternata轉化效率的影響對體繫進行優化.結果確定瞭根癌農桿菌菌液體積為200 mL(OD_(600)=0.15),A.alternata分生孢子濃度為10~6箇/mL,在A.tumefaciens的預培養時期以及與A.alternata共培養時期分彆加入200 μmol/LAS,共培養時間48 h,轉化率達120～200箇/10~5分生孢子.在所篩選的約800箇轉化子中穫得瞭1株毒性明顯低于野生菌sd1的弱毒突變株t108,通過PCR驗證推測其毒力降低可能由于T-DNA插入阻斷瞭基因的錶達.該實驗結果為與突變相關基因的研究以及弱毒株t108的進一步研究和利用提供瞭實驗材料,也為深入研究鏈格孢sd1菌株的基因功能奠定瞭基礎.
본문이용래자질립pUCATPH적구소곡매색안산합성기인trpC적계동자(PtrpC)、종지자(Ttrpc)화조매소린산전이매항성기인(hph)이급식물표체재체pROK Ⅱ성공구건료괄용우사상진균적근암농간균개도전화적쌍원재체pROKIIHPH,병전화근암농간균Agrobacterium tumefaciens LBA4404,건립료근암농간균LBA4404개도적련격포Alternaria alternata분생포자전화체계;재종을선정향동(AS)농도、불동적공배양시간、수체균분생포자농도화농간균균액농도대A.alternata전화효솔적영향대체계진행우화.결과학정료근암농간균균액체적위200 mL(OD_(600)=0.15),A.alternata분생포자농도위10~6개/mL,재A.tumefaciens적예배양시기이급여A.alternata공배양시기분별가입200 μmol/LAS,공배양시간48 h,전화솔체120～200개/10~5분생포자.재소사선적약800개전화자중획득료1주독성명현저우야생균sd1적약독돌변주t108,통과PCR험증추측기독력강저가능유우T-DNA삽입조단료기인적표체.해실험결과위여돌변상관기인적연구이급약독주t108적진일보연구화이용제공료실험재료,야위심입연구련격포sd1균주적기인공능전정료기출.
