解剖科学进展
解剖科學進展
해부과학진전
PROGRESS OF ANATOMICAL SCIENCES
2010年
1期
27-32
,共6页
STAT3%慢病毒%轴突生长
STAT3%慢病毒%軸突生長
STAT3%만병독%축돌생장
目的 构建携带信号转导和转录激活蛋白STAT3和基因突变的雌激素受体ER的慢病毒载体,并转染受损的大鼠背根神经节神经元,研究其对神经元突起再生的作用.方法 运用基因重组技术,将STAT3、ER和核糖体介导的绿色荧光蛋白(IRES-GFP)片段插入慢病毒载体pRRL-MCS+的PmeI位点构建慢病毒载体pRRL-STAT3ER-IRES-GFP,经RT-PCR、Western blotting和测序分析加以鉴定其正确性.将慢病毒载体3质粒细胞包装系统(主体质粒pRRL-STAT3ER-IRES-GFP、包装质粒pCMVdeltaR8.74和包膜质粒VSV-G)共转染293T细胞,包装慢病毒载体并测定滴度.切断大鼠左L5近神经节的神经根,摘取L5背根神经节做分离神经元培养,将pRRL-STAT3ER-IRES-GFP感染神经元细胞并观察神经元细胞核转运和突起的长度.结果 构建的慢病毒载体pRRL-STAT3ER-IRES-GFP经RT-PCR和Western blotting鉴定正确,测序分析与Genbank报道的STAT3基因序列完全一致.3质粒共转染293T咖胞后,测定慢病毒滴度为1010-11Tu/ml.转染pRRL-STAT3ER-IRES-GFP的神经元经4-羟基三苯氧胺(4HT)激活,STAT3ER有明显的核转运,并增强突起的生长,经X2检验与对照组有显著性差异.结论 成功构建了表达小鼠STAT3ER基因的慢病毒载体并证实STAT3信号转导有利于轴突生长.
目的 構建攜帶信號轉導和轉錄激活蛋白STAT3和基因突變的雌激素受體ER的慢病毒載體,併轉染受損的大鼠揹根神經節神經元,研究其對神經元突起再生的作用.方法 運用基因重組技術,將STAT3、ER和覈糖體介導的綠色熒光蛋白(IRES-GFP)片段插入慢病毒載體pRRL-MCS+的PmeI位點構建慢病毒載體pRRL-STAT3ER-IRES-GFP,經RT-PCR、Western blotting和測序分析加以鑒定其正確性.將慢病毒載體3質粒細胞包裝繫統(主體質粒pRRL-STAT3ER-IRES-GFP、包裝質粒pCMVdeltaR8.74和包膜質粒VSV-G)共轉染293T細胞,包裝慢病毒載體併測定滴度.切斷大鼠左L5近神經節的神經根,摘取L5揹根神經節做分離神經元培養,將pRRL-STAT3ER-IRES-GFP感染神經元細胞併觀察神經元細胞覈轉運和突起的長度.結果 構建的慢病毒載體pRRL-STAT3ER-IRES-GFP經RT-PCR和Western blotting鑒定正確,測序分析與Genbank報道的STAT3基因序列完全一緻.3質粒共轉染293T咖胞後,測定慢病毒滴度為1010-11Tu/ml.轉染pRRL-STAT3ER-IRES-GFP的神經元經4-羥基三苯氧胺(4HT)激活,STAT3ER有明顯的覈轉運,併增彊突起的生長,經X2檢驗與對照組有顯著性差異.結論 成功構建瞭錶達小鼠STAT3ER基因的慢病毒載體併證實STAT3信號轉導有利于軸突生長.
목적 구건휴대신호전도화전록격활단백STAT3화기인돌변적자격소수체ER적만병독재체,병전염수손적대서배근신경절신경원,연구기대신경원돌기재생적작용.방법 운용기인중조기술,장STAT3、ER화핵당체개도적록색형광단백(IRES-GFP)편단삽입만병독재체pRRL-MCS+적PmeI위점구건만병독재체pRRL-STAT3ER-IRES-GFP,경RT-PCR、Western blotting화측서분석가이감정기정학성.장만병독재체3질립세포포장계통(주체질립pRRL-STAT3ER-IRES-GFP、포장질립pCMVdeltaR8.74화포막질립VSV-G)공전염293T세포,포장만병독재체병측정적도.절단대서좌L5근신경절적신경근,적취L5배근신경절주분리신경원배양,장pRRL-STAT3ER-IRES-GFP감염신경원세포병관찰신경원세포핵전운화돌기적장도.결과 구건적만병독재체pRRL-STAT3ER-IRES-GFP경RT-PCR화Western blotting감정정학,측서분석여Genbank보도적STAT3기인서렬완전일치.3질립공전염293T가포후,측정만병독적도위1010-11Tu/ml.전염pRRL-STAT3ER-IRES-GFP적신경원경4-간기삼분양알(4HT)격활,STAT3ER유명현적핵전운,병증강돌기적생장,경X2검험여대조조유현저성차이.결론 성공구건료표체소서STAT3ER기인적만병독재체병증실STAT3신호전도유리우축돌생장.
