CAJ | 학술논문

目的:克隆表达出桃拉综合征病毒(TSV)主要衣壳蛋白CP2蛋白,并通过对噬菌体随机肽库的淘选,得到与CP2蛋白结合的相关多肽,以探讨CP2蛋白与配体作用的特异位点.方法:根据重组质粒pMD-CP2的核苷酸序列,设计并合成了一对引物,扩增TSV CP2基因高变区376～1 371 bp,扩增片段插入pET-32构建成原核表达载体pET-CP2.该重组载体在IPTG诱导下进行可溶性表达,SDS-PAGE电泳检测表达的CP2蛋白.以纯化的CP2蛋白作为筛选分子,对噬菌体展示12肽库进行亲和淘选.结果:原核表达出56 kD大小的CP2蛋白,对噬菌体12肽库4轮"吸附-洗脱-扩增"淘洗后,所得的噬菌体回收率逐步提高,由6.4×10-5上升到2.8×10-2,显示淘选过程对随机肽库有很好的富集效果.随机挑选第4轮淘筛后的36个单克隆噬菌体,ELISA鉴定有24个单克隆(66.6%)为强阳性.将这24个阳性克隆扩增、测序,推导随机多肽的氨基酸序列.分析发现,有7个克隆(克隆号2、6、7、9、18、20、33)完全一致,序列为HTSFCSTHLCLI,其它的几个克隆如克隆3及28序列为HCSNLFCSLDLP;克隆5为HCSHTLCALHVM;克隆26为HCNSWLCPLITD也与该7个克隆有相似的序列,经比对核心序列为HCS及LCL.结论:首次用重组的TSV CP2蛋白从噬菌体随机12肽库中筛选到特异结合的肽序列,其共有结构特征为明确CP2与结合蛋白的相互作用位点提供支持.
목적:극륭표체출도랍종합정병독(TSV)주요의각단백CP2단백,병통과대서균체수궤태고적도선,득도여CP2단백결합적상관다태,이탐토CP2단백여배체작용적특이위점.방법:근거중조질립pMD-CP2적핵감산서렬,설계병합성료일대인물,확증TSV CP2기인고변구376～1 371 bp,확증편단삽입pET-32구건성원핵표체재체pET-CP2.해중조재체재IPTG유도하진행가용성표체,SDS-PAGE전영검측표체적CP2단백.이순화적CP2단백작위사선분자,대서균체전시12태고진행친화도선.결과:원핵표체출56 kD대소적CP2단백,대서균체12태고4륜"흡부-세탈-확증"도세후,소득적서균체회수솔축보제고,유6.4×10-5상승도2.8×10-2,현시도선과정대수궤태고유흔호적부집효과.수궤도선제4륜도사후적36개단극륭서균체,ELISA감정유24개단극륭(66.6%)위강양성.장저24개양성극륭확증、측서,추도수궤다태적안기산서렬.분석발현,유7개극륭(극륭호2、6、7、9、18、20、33)완전일치,서렬위HTSFCSTHLCLI,기타적궤개극륭여극륭3급28서렬위HCSNLFCSLDLP;극륭5위HCSHTLCALHVM;극륭26위HCNSWLCPLITD야여해7개극륭유상사적서렬,경비대핵심서렬위HCS급LCL.결론:수차용중조적TSV CP2단백종서균체수궤12태고중사선도특이결합적태서렬,기공유결구특정위명학CP2여결합단백적상호작용위점제공지지.