华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2013年
3期
262-267
,共6页
肖海兵%李建英%曹旭%刘人恺%李雯飞%杨志刚%林勤郁%杨春水
肖海兵%李建英%曹旭%劉人愷%李雯飛%楊誌剛%林勤鬱%楊春水
초해병%리건영%조욱%류인개%리문비%양지강%림근욱%양춘수
1,5-二咖啡酰奎宁酸%核因子2红系相关因子2%氧化应激%Erk激酶%帕金森病
1,5-二咖啡酰奎寧痠%覈因子2紅繫相關因子2%氧化應激%Erk激酶%帕金森病
1,5-이가배선규저산%핵인자2홍계상관인자2%양화응격%Erk격매%파금삼병
目的 探讨1,5-二咖啡酰奎宁酸(1,5-diCQA)是否通过激活Nrf2而减轻1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)所致的PC12细胞损伤,并对可能的信号通路进行研究.方法 采用MPP+处理具有多巴胺(DA)能神经元特性的PC12细胞作为帕金森病(PD)的体外模型.实验分为正常对照组、MPP+处理组、1,5-diCQA预处理+MPP+处理组,为了观察1,5-diCQA预处理的浓度-效应关系,将1,5-diCQA的浓度设为10、20、50、100 μmol/L.用CCK8法测定各组细胞存活率,酶标仪检测细胞谷胱甘肽(GSH)水平和活性氧族(ROS)水平,Western blot 检测各组细胞的Nrf2蛋白水平.进一步采用siRNA转染沉默Nrf2,加入MAPK家族一系列激酶抑制剂后再检测上述相关指标.结果 MPP+ (250 mmol/L)处理PC12细胞24 h后,与正常对照组相比,细胞存活率下降,GSH耗竭,ROS生成增多,说明PD细胞模型建立成功.不同浓度的1,5-diCQA预处理可以减轻MPP+导致的细胞损伤,且在一定范围内具有量效关系;不同浓度的1,5-diCQA预处理可以明显上调Nrf2蛋白的水平.沉默Nrf2后,1,5-diCQA预处理对MPP+诱导损伤的PC12细胞的保护作用消失,细胞存活率未能回升[MPP+组vs.MPP++1,5-diCQA组:(19.47 ± 1.65)% vs.(21.13 ± 2.85)%,P=0.352 6],GSH水平在Nrf2敲除的PC12细胞中明显下降[NT siRNA组vs.Nrf2 siRNA组:(15.05 ± 1.71)nmol/mg protein vs.(4.31 ± 0.83) nmol/mg protein,P＜0.001],且1,5-diCQA预处理对GSH耗竭的逆转效应也消失.对MAPK激酶家族的一系列激酶进行信号通路筛选发现,Erk激酶参与了1,5-diCQA通过激活Nrf2而减轻MPP+诱导的PC12细胞损伤这一过程.结论 1,5-diCQA可浓度依赖性地减轻MPP+诱导的PC12氧化应激损伤.这种保护作用是通过激活Erk激酶,进而激活Nrf2,然后上调细胞内源性抗氧化系统来实现的.
目的 探討1,5-二咖啡酰奎寧痠(1,5-diCQA)是否通過激活Nrf2而減輕1-甲基-4-苯基吡啶離子(MPP+)所緻的PC12細胞損傷,併對可能的信號通路進行研究.方法 採用MPP+處理具有多巴胺(DA)能神經元特性的PC12細胞作為帕金森病(PD)的體外模型.實驗分為正常對照組、MPP+處理組、1,5-diCQA預處理+MPP+處理組,為瞭觀察1,5-diCQA預處理的濃度-效應關繫,將1,5-diCQA的濃度設為10、20、50、100 μmol/L.用CCK8法測定各組細胞存活率,酶標儀檢測細胞穀胱甘肽(GSH)水平和活性氧族(ROS)水平,Western blot 檢測各組細胞的Nrf2蛋白水平.進一步採用siRNA轉染沉默Nrf2,加入MAPK傢族一繫列激酶抑製劑後再檢測上述相關指標.結果 MPP+ (250 mmol/L)處理PC12細胞24 h後,與正常對照組相比,細胞存活率下降,GSH耗竭,ROS生成增多,說明PD細胞模型建立成功.不同濃度的1,5-diCQA預處理可以減輕MPP+導緻的細胞損傷,且在一定範圍內具有量效關繫;不同濃度的1,5-diCQA預處理可以明顯上調Nrf2蛋白的水平.沉默Nrf2後,1,5-diCQA預處理對MPP+誘導損傷的PC12細胞的保護作用消失,細胞存活率未能迴升[MPP+組vs.MPP++1,5-diCQA組:(19.47 ± 1.65)% vs.(21.13 ± 2.85)%,P=0.352 6],GSH水平在Nrf2敲除的PC12細胞中明顯下降[NT siRNA組vs.Nrf2 siRNA組:(15.05 ± 1.71)nmol/mg protein vs.(4.31 ± 0.83) nmol/mg protein,P＜0.001],且1,5-diCQA預處理對GSH耗竭的逆轉效應也消失.對MAPK激酶傢族的一繫列激酶進行信號通路篩選髮現,Erk激酶參與瞭1,5-diCQA通過激活Nrf2而減輕MPP+誘導的PC12細胞損傷這一過程.結論 1,5-diCQA可濃度依賴性地減輕MPP+誘導的PC12氧化應激損傷.這種保護作用是通過激活Erk激酶,進而激活Nrf2,然後上調細胞內源性抗氧化繫統來實現的.
목적 탐토1,5-이가배선규저산(1,5-diCQA)시부통과격활Nrf2이감경1-갑기-4-분기필정리자(MPP+)소치적PC12세포손상,병대가능적신호통로진행연구.방법 채용MPP+처리구유다파알(DA)능신경원특성적PC12세포작위파금삼병(PD)적체외모형.실험분위정상대조조、MPP+처리조、1,5-diCQA예처리+MPP+처리조,위료관찰1,5-diCQA예처리적농도-효응관계,장1,5-diCQA적농도설위10、20、50、100 μmol/L.용CCK8법측정각조세포존활솔,매표의검측세포곡광감태(GSH)수평화활성양족(ROS)수평,Western blot 검측각조세포적Nrf2단백수평.진일보채용siRNA전염침묵Nrf2,가입MAPK가족일계렬격매억제제후재검측상술상관지표.결과 MPP+ (250 mmol/L)처리PC12세포24 h후,여정상대조조상비,세포존활솔하강,GSH모갈,ROS생성증다,설명PD세포모형건립성공.불동농도적1,5-diCQA예처리가이감경MPP+도치적세포손상,차재일정범위내구유량효관계;불동농도적1,5-diCQA예처리가이명현상조Nrf2단백적수평.침묵Nrf2후,1,5-diCQA예처리대MPP+유도손상적PC12세포적보호작용소실,세포존활솔미능회승[MPP+조vs.MPP++1,5-diCQA조:(19.47 ± 1.65)% vs.(21.13 ± 2.85)%,P=0.352 6],GSH수평재Nrf2고제적PC12세포중명현하강[NT siRNA조vs.Nrf2 siRNA조:(15.05 ± 1.71)nmol/mg protein vs.(4.31 ± 0.83) nmol/mg protein,P＜0.001],차1,5-diCQA예처리대GSH모갈적역전효응야소실.대MAPK격매가족적일계렬격매진행신호통로사선발현,Erk격매삼여료1,5-diCQA통과격활Nrf2이감경MPP+유도적PC12세포손상저일과정.결론 1,5-diCQA가농도의뢰성지감경MPP+유도적PC12양화응격손상.저충보호작용시통과격활Erk격매,진이격활Nrf2,연후상조세포내원성항양화계통래실현적.
