CAJ | 학술논문

在提取高质量八角基因组DNA的基础上,通过对其RAPD反应体系的Taq DNA聚合酶、dNTPs浓度、Ｍg2+浓度、引物浓度等因子的优化,建立了稳定、重复性高的八角RAPD-PCR反应体系.研究结果表明,在25 μL PCR反应体系中,含1.0 UTaq DNA聚合酶,0.15 mmol·L-1 dNTPs,2.0mmol·L-1 Mg2+,2.0 μmol·L-1引物,20～ 80 ng模板.最佳反应程序为,94℃预变性5 min,扩增后94℃变性30 s,31 ～37℃退火30 s,72℃延伸30 s,35个循环;72℃完全延伸7 min,4℃保存.在建立RAPD-PCR反应体系的基础上,从240条RAPD引物中筛选出15条扩增条带清晰、稳定性好的引物,并通过各引物的退火温度梯度实验,确定了各引物的最适退火温度.
재제취고질량팔각기인조DNA적기출상,통과대기RAPD반응체계적Taq DNA취합매、dNTPs농도、Ｍg2+농도、인물농도등인자적우화,건립료은정、중복성고적팔각RAPD-PCR반응체계.연구결과표명,재25 μL PCR반응체계중,함1.0 UTaq DNA취합매,0.15 mmol·L-1 dNTPs,2.0mmol·L-1 Mg2+,2.0 μmol·L-1인물,20～ 80 ng모판.최가반응정서위,94℃예변성5 min,확증후94℃변성30 s,31 ～37℃퇴화30 s,72℃연신30 s,35개순배;72℃완전연신7 min,4℃보존.재건립RAPD-PCR반응체계적기출상,종240조RAPD인물중사선출15조확증조대청석、은정성호적인물,병통과각인물적퇴화온도제도실험,학정료각인물적최괄퇴화온도.