广东医学
廣東醫學
엄동의학
GUNAGDONG MEDICAL JOURNAL
2013年
11期
1657-1660
,共4页
李风梅%俞辉%宋金龙%刘忠民
李風梅%俞輝%宋金龍%劉忠民
리풍매%유휘%송금룡%류충민
人前蛋白转化酶枯草溶菌素9%表达载体%诱导表达%优化条件
人前蛋白轉化酶枯草溶菌素9%錶達載體%誘導錶達%優化條件
인전단백전화매고초용균소9%표체재체%유도표체%우화조건
目的 构建人前蛋白转化酶枯草溶菌素9(pcsk9)的原核表达载体,优化pcsk9诱导表达条件.方法 聚合酶链式反应扩增人工合成的pcsk9 cDNA序列.扩增产物经双酶切、连接,构建pET-28b-pcsk9表达载体;将重组质粒转化入大肠杆菌表达菌BL21(DE3)的感受态细胞中,分别在不同条件下对其进行诱导,获得pET-28b-pcsk9的最佳诱导表达条件.结果 成功构建了pET-28b-pcsk9重组表达载体,其最佳表达条件为菌液光密度值取0.6,诱导温度取30℃,诱导剂终浓度取1.0 mmol/L,诱导时间取8 h.结论 该重组表达载体构建成功,在大肠杆菌表达菌BL21(DE3)中可有效地表达,对诱导所用的温度和时间相对比较敏感.
目的 構建人前蛋白轉化酶枯草溶菌素9(pcsk9)的原覈錶達載體,優化pcsk9誘導錶達條件.方法 聚閤酶鏈式反應擴增人工閤成的pcsk9 cDNA序列.擴增產物經雙酶切、連接,構建pET-28b-pcsk9錶達載體;將重組質粒轉化入大腸桿菌錶達菌BL21(DE3)的感受態細胞中,分彆在不同條件下對其進行誘導,穫得pET-28b-pcsk9的最佳誘導錶達條件.結果 成功構建瞭pET-28b-pcsk9重組錶達載體,其最佳錶達條件為菌液光密度值取0.6,誘導溫度取30℃,誘導劑終濃度取1.0 mmol/L,誘導時間取8 h.結論 該重組錶達載體構建成功,在大腸桿菌錶達菌BL21(DE3)中可有效地錶達,對誘導所用的溫度和時間相對比較敏感.
목적 구건인전단백전화매고초용균소9(pcsk9)적원핵표체재체,우화pcsk9유도표체조건.방법 취합매련식반응확증인공합성적pcsk9 cDNA서렬.확증산물경쌍매절、련접,구건pET-28b-pcsk9표체재체;장중조질립전화입대장간균표체균BL21(DE3)적감수태세포중,분별재불동조건하대기진행유도,획득pET-28b-pcsk9적최가유도표체조건.결과 성공구건료pET-28b-pcsk9중조표체재체,기최가표체조건위균액광밀도치취0.6,유도온도취30℃,유도제종농도취1.0 mmol/L,유도시간취8 h.결론 해중조표체재체구건성공,재대장간균표체균BL21(DE3)중가유효지표체,대유도소용적온도화시간상대비교민감.
