石河子大学学报（自然科学版）
石河子大學學報（自然科學版）
석하자대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SHIHEZI UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE)
2012年
4期
429-433
,共5页
秦荣%张伟%刘炜炜%张建云%黄家风
秦榮%張偉%劉煒煒%張建雲%黃傢風
진영%장위%류위위%장건운%황가풍
dsRNA%基因沉默%融合基因%载体构建%双价抗性
dsRNA%基因沉默%融閤基因%載體構建%雙價抗性
dsRNA%기인침묵%융합기인%재체구건%쌍개항성
利用基因沉默的原理构建了能转录产生dsRNA,诱导植物发生RNA沉默的沉默载体.根据已报道的番茄花叶病毒(ToMV)的运动蛋白基因(MP)和黄瓜花叶病毒(CMV)的沉默抑制子基因(Rep)的核苷酸序列设计特异性引物,扩增到△MP基因片段和Rep基因片段;然后通过重组PCR技术将2个病毒基因进行融合,获得长度为711 bp的融合基因△MP-Rep.将融合基因以反向重复的方式与大豆内含子相连,得到含有融合基因反向重复序列的重组质粒pBlue SK-Intron△MP-Rep(i/r).再用限制性内切酶BamH Ⅰ切下包含Intron在内的反向重复的融合基因,并定向插入到植物表达载体pBIN438上,构建了含2种病毒基因的植物表达载体pBIN438△MP-Rep(i/r).酶切和PCR鉴定证明所构建的载体与预期的设计完全一致.该研究结果为利用RNA沉默原理进行植物广谱抗病研究奠定了基础.
利用基因沉默的原理構建瞭能轉錄產生dsRNA,誘導植物髮生RNA沉默的沉默載體.根據已報道的番茄花葉病毒(ToMV)的運動蛋白基因(MP)和黃瓜花葉病毒(CMV)的沉默抑製子基因(Rep)的覈苷痠序列設計特異性引物,擴增到△MP基因片段和Rep基因片段;然後通過重組PCR技術將2箇病毒基因進行融閤,穫得長度為711 bp的融閤基因△MP-Rep.將融閤基因以反嚮重複的方式與大豆內含子相連,得到含有融閤基因反嚮重複序列的重組質粒pBlue SK-Intron△MP-Rep(i/r).再用限製性內切酶BamH Ⅰ切下包含Intron在內的反嚮重複的融閤基因,併定嚮插入到植物錶達載體pBIN438上,構建瞭含2種病毒基因的植物錶達載體pBIN438△MP-Rep(i/r).酶切和PCR鑒定證明所構建的載體與預期的設計完全一緻.該研究結果為利用RNA沉默原理進行植物廣譜抗病研究奠定瞭基礎.
이용기인침묵적원리구건료능전록산생dsRNA,유도식물발생RNA침묵적침묵재체.근거이보도적번가화협병독(ToMV)적운동단백기인(MP)화황과화협병독(CMV)적침묵억제자기인(Rep)적핵감산서렬설계특이성인물,확증도△MP기인편단화Rep기인편단;연후통과중조PCR기술장2개병독기인진행융합,획득장도위711 bp적융합기인△MP-Rep.장융합기인이반향중복적방식여대두내함자상련,득도함유융합기인반향중복서렬적중조질립pBlue SK-Intron△MP-Rep(i/r).재용한제성내절매BamH Ⅰ절하포함Intron재내적반향중복적융합기인,병정향삽입도식물표체재체pBIN438상,구건료함2충병독기인적식물표체재체pBIN438△MP-Rep(i/r).매절화PCR감정증명소구건적재체여예기적설계완전일치.해연구결과위이용RNA침묵원리진행식물엄보항병연구전정료기출.
