徐州医学院学报
徐州醫學院學報
서주의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE XUZHOU
2013年
11期
709-713
,共5页
闫伟%袁光达%张中明%董红燕
閆偉%袁光達%張中明%董紅燕
염위%원광체%장중명%동홍연
色素上皮衍生因子%44mer基因%6his%慢病毒表达载体
色素上皮衍生因子%44mer基因%6his%慢病毒錶達載體
색소상피연생인자%44mer기인%6his%만병독표체재체
目的 构建大鼠色素上皮衍生因子(PEDF)44mer基因的慢病毒表达载体并检测其表达.方法 化学合成PEDF 44mer-6his,亚克隆入GV206载体,测序鉴定.挑取阳性克隆转染293T细胞,实时荧光定量PCR法测定病毒滴度.将已构建的病毒转染293T细胞,RT-PCR和Western blot法检测44mer-6his表达.结果 阳性克隆测序与设计的44mer基因序列完全一致,44mer慢病毒构建成功.实时荧光定量 PCR法检测病毒滴度为2.00E+9 TU/ml.44mer慢病毒转染293T细胞后,RT-PCR检测到44mer表达.Western blot显示44mer-6his融合蛋白表达阳性.结论 成功设计构建了PEDF 44mer慢病毒,为进一步研究44mer在缺血性心肌病中的作用和机制奠定基础.
目的 構建大鼠色素上皮衍生因子(PEDF)44mer基因的慢病毒錶達載體併檢測其錶達.方法 化學閤成PEDF 44mer-6his,亞剋隆入GV206載體,測序鑒定.挑取暘性剋隆轉染293T細胞,實時熒光定量PCR法測定病毒滴度.將已構建的病毒轉染293T細胞,RT-PCR和Western blot法檢測44mer-6his錶達.結果 暘性剋隆測序與設計的44mer基因序列完全一緻,44mer慢病毒構建成功.實時熒光定量 PCR法檢測病毒滴度為2.00E+9 TU/ml.44mer慢病毒轉染293T細胞後,RT-PCR檢測到44mer錶達.Western blot顯示44mer-6his融閤蛋白錶達暘性.結論 成功設計構建瞭PEDF 44mer慢病毒,為進一步研究44mer在缺血性心肌病中的作用和機製奠定基礎.
목적 구건대서색소상피연생인자(PEDF)44mer기인적만병독표체재체병검측기표체.방법 화학합성PEDF 44mer-6his,아극륭입GV206재체,측서감정.도취양성극륭전염293T세포,실시형광정량PCR법측정병독적도.장이구건적병독전염293T세포,RT-PCR화Western blot법검측44mer-6his표체.결과 양성극륭측서여설계적44mer기인서렬완전일치,44mer만병독구건성공.실시형광정량 PCR법검측병독적도위2.00E+9 TU/ml.44mer만병독전염293T세포후,RT-PCR검측도44mer표체.Western blot현시44mer-6his융합단백표체양성.결론 성공설계구건료PEDF 44mer만병독,위진일보연구44mer재결혈성심기병중적작용화궤제전정기출.
