激光生物学报
激光生物學報
격광생물학보
ACTA LASER BIOLOGY SINICA
2013年
3期
243-248
,共6页
马金柱%王化磊%郑学星%吴红霞%赵永坤%王铁成%杨松涛%夏咸柱
馬金柱%王化磊%鄭學星%吳紅霞%趙永坤%王鐵成%楊鬆濤%夏鹹柱
마금주%왕화뢰%정학성%오홍하%조영곤%왕철성%양송도%하함주
西方马脑炎病毒%载体构建%核酸疫苗%免疫原性
西方馬腦炎病毒%載體構建%覈痠疫苗%免疫原性
서방마뇌염병독%재체구건%핵산역묘%면역원성
western equine encephalomyelitis virus%vector construction%DNA vaccine%immunogenicity
为构建西方马脑炎病毒(western equine encephalomyelitis virus,WEEV)结构基因C-E3-E2-6k-E1重组真核表达载体,并研究其作为核酸疫苗的免疫原性.采用PCR方法扩增目的基因,酶切之后连接到pcDNA3.1上构建真核表达载体pcDNA3.1-C-E,用酶切和测序分析方法鉴定正确后,重组质粒被转染到293T细胞,经电镜检测和间接免疫荧光方法证明基因可以表达后,用该重组质粒免疫小鼠,免疫后检测实验组小鼠外周血中CD4+T细胞/CD8+T细胞比例和血清中细胞因子IL-2、IL-4及IFN-γ浓度,以上实验组各项免疫指标与对照组相比差异均显著(P＜ 0.05);ELISA方法检测实验组小鼠血清中WEEV的IgG抗体效价是1∶16.研究结果表明重组质粒pcDNA3.1-C-E可在细胞中获得瞬时表达,并且重组质粒作为核酸疫苗能够刺激小鼠产生免疫反应,具有较强免疫原性,为今后WEEV核酸疫苗研制奠定了良好基础.
為構建西方馬腦炎病毒(western equine encephalomyelitis virus,WEEV)結構基因C-E3-E2-6k-E1重組真覈錶達載體,併研究其作為覈痠疫苗的免疫原性.採用PCR方法擴增目的基因,酶切之後連接到pcDNA3.1上構建真覈錶達載體pcDNA3.1-C-E,用酶切和測序分析方法鑒定正確後,重組質粒被轉染到293T細胞,經電鏡檢測和間接免疫熒光方法證明基因可以錶達後,用該重組質粒免疫小鼠,免疫後檢測實驗組小鼠外週血中CD4+T細胞/CD8+T細胞比例和血清中細胞因子IL-2、IL-4及IFN-γ濃度,以上實驗組各項免疫指標與對照組相比差異均顯著(P＜ 0.05);ELISA方法檢測實驗組小鼠血清中WEEV的IgG抗體效價是1∶16.研究結果錶明重組質粒pcDNA3.1-C-E可在細胞中穫得瞬時錶達,併且重組質粒作為覈痠疫苗能夠刺激小鼠產生免疫反應,具有較彊免疫原性,為今後WEEV覈痠疫苗研製奠定瞭良好基礎.
위구건서방마뇌염병독(western equine encephalomyelitis virus,WEEV)결구기인C-E3-E2-6k-E1중조진핵표체재체,병연구기작위핵산역묘적면역원성.채용PCR방법확증목적기인,매절지후련접도pcDNA3.1상구건진핵표체재체pcDNA3.1-C-E,용매절화측서분석방법감정정학후,중조질립피전염도293T세포,경전경검측화간접면역형광방법증명기인가이표체후,용해중조질립면역소서,면역후검측실험조소서외주혈중CD4+T세포/CD8+T세포비례화혈청중세포인자IL-2、IL-4급IFN-γ농도,이상실험조각항면역지표여대조조상비차이균현저(P＜ 0.05);ELISA방법검측실험조소서혈청중WEEV적IgG항체효개시1∶16.연구결과표명중조질립pcDNA3.1-C-E가재세포중획득순시표체,병차중조질립작위핵산역묘능구자격소서산생면역반응,구유교강면역원성,위금후WEEV핵산역묘연제전정료량호기출.
