浙江农林大学学报
浙江農林大學學報
절강농림대학학보
JOURNAL OF ZHEJIANG FORESTRY COLLEGE
2012年
6期
960-965
,共6页
林木育种学%光皮桦%EST-SSR%PCR反应体系%正交设计
林木育種學%光皮樺%EST-SSR%PCR反應體繫%正交設計
림목육충학%광피화%EST-SSR%PCR반응체계%정교설계
为获得稳定的聚合酶链式反应(PCR)产物,采用正交设计L25(56)对光皮桦Betula luminifera表达序列标签-简单重复序列聚合酶链式反应(EST-SSR PCR)反应体系中的5个因素:DNA模板浓度,引物浓度,镁离子(Mg2+)浓度,三磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs)浓度和DNA聚合酶量进行优化,每个因素设计5个水平.优化试验结果表明:光皮桦EST-SSR最佳PCR反应体系:4.0 mg·L-1DNA模板,0.500 μmol·L-1引物,1.250 mmol· L-1 Mg2+,0.250mmol· L-1dNTPs,0.072 5×16.67 mkat·L-1rTaq酶.通过梯度PCR试验筛选得到相应引物的最佳退火温度.对优化出的EST-SSR PCR反应体系进行稳定性检测,结果均能获得稳定、清晰可辨的DNA谱带.
為穫得穩定的聚閤酶鏈式反應(PCR)產物,採用正交設計L25(56)對光皮樺Betula luminifera錶達序列標籤-簡單重複序列聚閤酶鏈式反應(EST-SSR PCR)反應體繫中的5箇因素:DNA模闆濃度,引物濃度,鎂離子(Mg2+)濃度,三燐痠堿基脫氧覈苷痠(dNTPs)濃度和DNA聚閤酶量進行優化,每箇因素設計5箇水平.優化試驗結果錶明:光皮樺EST-SSR最佳PCR反應體繫:4.0 mg·L-1DNA模闆,0.500 μmol·L-1引物,1.250 mmol· L-1 Mg2+,0.250mmol· L-1dNTPs,0.072 5×16.67 mkat·L-1rTaq酶.通過梯度PCR試驗篩選得到相應引物的最佳退火溫度.對優化齣的EST-SSR PCR反應體繫進行穩定性檢測,結果均能穫得穩定、清晰可辨的DNA譜帶.
위획득은정적취합매련식반응(PCR)산물,채용정교설계L25(56)대광피화Betula luminifera표체서렬표첨-간단중복서렬취합매련식반응(EST-SSR PCR)반응체계중적5개인소:DNA모판농도,인물농도,미리자(Mg2+)농도,삼린산감기탈양핵감산(dNTPs)농도화DNA취합매량진행우화,매개인소설계5개수평.우화시험결과표명:광피화EST-SSR최가PCR반응체계:4.0 mg·L-1DNA모판,0.500 μmol·L-1인물,1.250 mmol· L-1 Mg2+,0.250mmol· L-1dNTPs,0.072 5×16.67 mkat·L-1rTaq매.통과제도PCR시험사선득도상응인물적최가퇴화온도.대우화출적EST-SSR PCR반응체계진행은정성검측,결과균능획득은정、청석가변적DNA보대.
