现代泌尿外科杂志
現代泌尿外科雜誌
현대비뇨외과잡지
JOURNAL OF MODERN UROLOGY
2014年
5期
325-328
,共4页
吕川%王新阳%谢宏俊%陈佳琦%宁忠运%刘伟%杨昭%贺大林%李磊
呂川%王新暘%謝宏俊%陳佳琦%寧忠運%劉偉%楊昭%賀大林%李磊
려천%왕신양%사굉준%진가기%저충운%류위%양소%하대림%리뢰
PrLZ%微小RNA%3'非编码区%荧光素酶报告载体%基因调控
PrLZ%微小RNA%3'非編碼區%熒光素酶報告載體%基因調控
PrLZ%미소RNA%3'비편마구%형광소매보고재체%기인조공
PrLZ%microRNA%3'-UTR%luciferase reporter vector%gene regulation
目的 分析前列腺亮氨酸拉链(PrLZ)基因3'非编码区(3' UTR)可能的微小RNA (miRNA)调控位点,构建PrLZ基因3-UTR荧光素酶报告载体,为研究PrLZ基因转录后的miRNA调控提供有效的工具.方法 使用PCR方法从PrLZ阳性的C4-2细胞中扩增含PrLZ基因3'-UTR区序列,插入到T-Vector载体上,提高PCR产物的连接、克隆效率,通过Xbal和BamHI限制性内切酶双酶切后将其连入经相同内切酶双酶切后的荧光素酶报告基因载体pLUC中,构建pLUC-PrLZ 3'-UTR载体,使用生物信息学方法预测PrLZ基因3'-UTR可能是miR-34a的作用靶点,使用慢病毒载体构建对照载体(质粒名称NC)和过表达miR-34a(质粒名称miR-34a),包装成病毒颗粒后分别感染293 T细胞,然后通过X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent转染试剂将pLUC空质粒和pLUC-PrLZ 3'-UTR重组质粒分别转染293-T细胞,Promega试剂盒测定荧光素酶的活性.结果 得到含PrLZ基因3'-UTR序列的荧光素酶报告重组质粒,并用凝胶电泳和基因测序的方法验证了其序列的正确性.在miR 34a高表达组的293-T细胞中,重组质粒组荧光素酶活性比空质粒组低40％,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 成功构建PrLZ基因3'-UTR荧光素酶报告载体,miR 34a可以显著降低荧光素酶的活性,PrLZ基因3'-UTR上可能有miR-34a的调控作用靶点.
目的 分析前列腺亮氨痠拉鏈(PrLZ)基因3'非編碼區(3' UTR)可能的微小RNA (miRNA)調控位點,構建PrLZ基因3-UTR熒光素酶報告載體,為研究PrLZ基因轉錄後的miRNA調控提供有效的工具.方法 使用PCR方法從PrLZ暘性的C4-2細胞中擴增含PrLZ基因3'-UTR區序列,插入到T-Vector載體上,提高PCR產物的連接、剋隆效率,通過Xbal和BamHI限製性內切酶雙酶切後將其連入經相同內切酶雙酶切後的熒光素酶報告基因載體pLUC中,構建pLUC-PrLZ 3'-UTR載體,使用生物信息學方法預測PrLZ基因3'-UTR可能是miR-34a的作用靶點,使用慢病毒載體構建對照載體(質粒名稱NC)和過錶達miR-34a(質粒名稱miR-34a),包裝成病毒顆粒後分彆感染293 T細胞,然後通過X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent轉染試劑將pLUC空質粒和pLUC-PrLZ 3'-UTR重組質粒分彆轉染293-T細胞,Promega試劑盒測定熒光素酶的活性.結果 得到含PrLZ基因3'-UTR序列的熒光素酶報告重組質粒,併用凝膠電泳和基因測序的方法驗證瞭其序列的正確性.在miR 34a高錶達組的293-T細胞中,重組質粒組熒光素酶活性比空質粒組低40％,差異具有統計學意義(P＜0.05).結論 成功構建PrLZ基因3'-UTR熒光素酶報告載體,miR 34a可以顯著降低熒光素酶的活性,PrLZ基因3'-UTR上可能有miR-34a的調控作用靶點.
목적 분석전렬선량안산랍련(PrLZ)기인3'비편마구(3' UTR)가능적미소RNA (miRNA)조공위점,구건PrLZ기인3-UTR형광소매보고재체,위연구PrLZ기인전록후적miRNA조공제공유효적공구.방법 사용PCR방법종PrLZ양성적C4-2세포중확증함PrLZ기인3'-UTR구서렬,삽입도T-Vector재체상,제고PCR산물적련접、극륭효솔,통과Xbal화BamHI한제성내절매쌍매절후장기련입경상동내절매쌍매절후적형광소매보고기인재체pLUC중,구건pLUC-PrLZ 3'-UTR재체,사용생물신식학방법예측PrLZ기인3'-UTR가능시miR-34a적작용파점,사용만병독재체구건대조재체(질립명칭NC)화과표체miR-34a(질립명칭miR-34a),포장성병독과립후분별감염293 T세포,연후통과X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent전염시제장pLUC공질립화pLUC-PrLZ 3'-UTR중조질립분별전염293-T세포,Promega시제합측정형광소매적활성.결과 득도함PrLZ기인3'-UTR서렬적형광소매보고중조질립,병용응효전영화기인측서적방법험증료기서렬적정학성.재miR 34a고표체조적293-T세포중,중조질립조형광소매활성비공질립조저40％,차이구유통계학의의(P＜0.05).결론 성공구건PrLZ기인3'-UTR형광소매보고재체,miR 34a가이현저강저형광소매적활성,PrLZ기인3'-UTR상가능유miR-34a적조공작용파점.
