中国真菌学杂志
中國真菌學雜誌
중국진균학잡지
CHINESE JOURNAL OF MYCOLOGY
2013年
1期
10-13,19
,共5页
梁涛%刘珂凤%何宏%赵桂秋%王婷%喻文倩
樑濤%劉珂鳳%何宏%趙桂鞦%王婷%喻文倩
량도%류가봉%하굉%조계추%왕정%유문천
茄病镰刀菌%真菌性角膜炎%丝氨酸蛋白酶%RNA干扰
茄病鐮刀菌%真菌性角膜炎%絲氨痠蛋白酶%RNA榦擾
가병렴도균%진균성각막염%사안산단백매%RNA간우
目的 构建RNA干扰质粒载体抑制茄病镰刀菌碱性丝氨酸蛋白酶(ALP)基因,通过检测ALP的表达及酶活性变化筛选出基因沉默菌株.方法 构建2个ALP的干扰载体,转化茄病镰刀菌孢子,获得ALP基因沉默菌株△ALP1、△ALP2,通过RT-PCR检测△ALP1、△ALP2的ALP基因mRNA变化,并通过蛋白琼脂廓清率培养基检测ALP酶活性变化,对所得菌株的毒力进行判断.结果 RNA干扰后所获基因沉默菌株中,ALP的mRNA表达量显著低于标准茄病镰刀菌株(F =184.67,P＜0.01),其中△ALP2抑制效果较好、酶活性显著低于标准菌株及△ALPI(q=5.276、5.463,P＜0.01).结论 通过LiAc转化法对茄病镰刀菌ALP进行RNA干扰,可有效抑制茄病镰刀菌ALP的表达；ALP基因沉默茄病镰刀菌株的获取,为进行动物体内实验、深入研究ALP在茄病镰刀菌性角膜炎发病机制中的作用、探索新型治疗方法提供思路.
目的 構建RNA榦擾質粒載體抑製茄病鐮刀菌堿性絲氨痠蛋白酶(ALP)基因,通過檢測ALP的錶達及酶活性變化篩選齣基因沉默菌株.方法 構建2箇ALP的榦擾載體,轉化茄病鐮刀菌孢子,穫得ALP基因沉默菌株△ALP1、△ALP2,通過RT-PCR檢測△ALP1、△ALP2的ALP基因mRNA變化,併通過蛋白瓊脂廓清率培養基檢測ALP酶活性變化,對所得菌株的毒力進行判斷.結果 RNA榦擾後所穫基因沉默菌株中,ALP的mRNA錶達量顯著低于標準茄病鐮刀菌株(F =184.67,P＜0.01),其中△ALP2抑製效果較好、酶活性顯著低于標準菌株及△ALPI(q=5.276、5.463,P＜0.01).結論 通過LiAc轉化法對茄病鐮刀菌ALP進行RNA榦擾,可有效抑製茄病鐮刀菌ALP的錶達；ALP基因沉默茄病鐮刀菌株的穫取,為進行動物體內實驗、深入研究ALP在茄病鐮刀菌性角膜炎髮病機製中的作用、探索新型治療方法提供思路.
목적 구건RNA간우질립재체억제가병렴도균감성사안산단백매(ALP)기인,통과검측ALP적표체급매활성변화사선출기인침묵균주.방법 구건2개ALP적간우재체,전화가병렴도균포자,획득ALP기인침묵균주△ALP1、△ALP2,통과RT-PCR검측△ALP1、△ALP2적ALP기인mRNA변화,병통과단백경지곽청솔배양기검측ALP매활성변화,대소득균주적독력진행판단.결과 RNA간우후소획기인침묵균주중,ALP적mRNA표체량현저저우표준가병렴도균주(F =184.67,P＜0.01),기중△ALP2억제효과교호、매활성현저저우표준균주급△ALPI(q=5.276、5.463,P＜0.01).결론 통과LiAc전화법대가병렴도균ALP진행RNA간우,가유효억제가병렴도균ALP적표체；ALP기인침묵가병렴도균주적획취,위진행동물체내실험、심입연구ALP재가병렴도균성각막염발병궤제중적작용、탐색신형치료방법제공사로.
