徐州医学院学报
徐州醫學院學報
서주의학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE XUZHOU
2013年
2期
71-75
,共5页
侍阳%宋庆伟%于生才%周晓俊%殷骏%钱海鑫
侍暘%宋慶偉%于生纔%週曉俊%慇駿%錢海鑫
시양%송경위%우생재%주효준%은준%전해흠
4-1BB(CD137)%小干扰RNA%基因沉默
4-1BB(CD137)%小榦擾RNA%基因沉默
4-1BB(CD137)%소간우RNA%기인침묵
目的 为研究小干扰RNA(siRNA)在移植免疫、肿瘤防治等方面的应用,构建针对大鼠T细胞4-1BB基因编码区的短发夹RNA(shRNA)表达质粒.方法 根据RNA干扰(RNAi)作用原理,设计、合成4条T细胞4-1BB基因的shRNA(shRNA441、shRNA540、shRNA621、shRNA758) DNA片段,插入质粒pGPU6,构建4个编码目的shRNA的表达质粒(p441、p540、p621、p758),酶切及测序鉴定.设对照组,利用电穿孔法在体外将目的基因片段导入BN大鼠T细胞,48 h后,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术(FCM)检测其对T细胞4-1BB基因表达的抑制作用,并筛选、确定最佳效果的干扰质粒.结果 酶切及测序证实成功构建重组干扰质粒p441、p540 、p621和p758,转染T细胞后,4-1BB相对表达量分别为(33.4±2.3)％、(53.0±2.3)％、(62.1±3.1)％、(40.9±1.5)％,对照组4-1BB相对表达量为(67.2±1.5)％.其中p441沉默效果最佳(P＜0.01).结论 siRNA具有抑制活化T细胞4-1BB基因表达的作用,干涉靶点具有选择性.
目的 為研究小榦擾RNA(siRNA)在移植免疫、腫瘤防治等方麵的應用,構建針對大鼠T細胞4-1BB基因編碼區的短髮夾RNA(shRNA)錶達質粒.方法 根據RNA榦擾(RNAi)作用原理,設計、閤成4條T細胞4-1BB基因的shRNA(shRNA441、shRNA540、shRNA621、shRNA758) DNA片段,插入質粒pGPU6,構建4箇編碼目的shRNA的錶達質粒(p441、p540、p621、p758),酶切及測序鑒定.設對照組,利用電穿孔法在體外將目的基因片段導入BN大鼠T細胞,48 h後,逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)和流式細胞術(FCM)檢測其對T細胞4-1BB基因錶達的抑製作用,併篩選、確定最佳效果的榦擾質粒.結果 酶切及測序證實成功構建重組榦擾質粒p441、p540 、p621和p758,轉染T細胞後,4-1BB相對錶達量分彆為(33.4±2.3)％、(53.0±2.3)％、(62.1±3.1)％、(40.9±1.5)％,對照組4-1BB相對錶達量為(67.2±1.5)％.其中p441沉默效果最佳(P＜0.01).結論 siRNA具有抑製活化T細胞4-1BB基因錶達的作用,榦涉靶點具有選擇性.
목적 위연구소간우RNA(siRNA)재이식면역、종류방치등방면적응용,구건침대대서T세포4-1BB기인편마구적단발협RNA(shRNA)표체질립.방법 근거RNA간우(RNAi)작용원리,설계、합성4조T세포4-1BB기인적shRNA(shRNA441、shRNA540、shRNA621、shRNA758) DNA편단,삽입질립pGPU6,구건4개편마목적shRNA적표체질립(p441、p540、p621、p758),매절급측서감정.설대조조,이용전천공법재체외장목적기인편단도입BN대서T세포,48 h후,역전록-취합매련반응(RT-PCR)화류식세포술(FCM)검측기대T세포4-1BB기인표체적억제작용,병사선、학정최가효과적간우질립.결과 매절급측서증실성공구건중조간우질립p441、p540 、p621화p758,전염T세포후,4-1BB상대표체량분별위(33.4±2.3)％、(53.0±2.3)％、(62.1±3.1)％、(40.9±1.5)％,대조조4-1BB상대표체량위(67.2±1.5)％.기중p441침묵효과최가(P＜0.01).결론 siRNA구유억제활화T세포4-1BB기인표체적작용,간섭파점구유선택성.
