宁夏医科大学学报
寧夏醫科大學學報
저하의과대학학보
JOURNAL OF NINGXIA MEDICAL COLLEGE
2009年
5期
566-569,封4
,共5页
苏春霞%段相国%张艳丽%摆茹%陈溥言
囌春霞%段相國%張豔麗%襬茹%陳溥言
소춘하%단상국%장염려%파여%진부언
口蹄疫病毒%重组腺病毒%VP1基因
口蹄疫病毒%重組腺病毒%VP1基因
구제역병독%중조선병독%VP1기인
目的 构建表达O型口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth disease Vims,FMDV)VP1基因的重组腺病毒并对其进行鉴定.方法 将FMDV VP1基因克隆到腺病毒的穿梭载体pAdeno Vatotr-CMV5-IRES-GFP中.得到的阳性穿梭质粒经Pme Ⅰ酶线性化后.利用电转化技术将线性化的阳性质粒与腺病毒骨架载体pAdeno Vator△E1/E3共转化大肠杆菌BJ5183感受态细胞,使其在大肠杆菌中进行同源重组.将筛选到的重组病毒质粒经Pac-Ⅰ酶线性化后暴露出包装信号,通过脂质体LipofectamineTM2000转染HEK-293A细胞后得到重组病毒.利用报告基因GFP和细胞病变检测重组病毒滴度和感染效率,通过PCR和westem-blot检测FMDV VP1基因在重组腺病毒中的表达.结果 成功构建了表达FMDV VP1基因的重组腺病毒rAd5-VP1,其滴度为1011.87个TCID50/mL.western-blot检测重组腺病毒rAd5-VP1能与FMDV阳性血清发生反应.结论 重组腺病毒rAd5-VP1能与FMDV阳性血清发生反应,PCR和westem-blot检测FMDV VP1基因在重组腺病毒中稳定表达.
目的 構建錶達O型口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth disease Vims,FMDV)VP1基因的重組腺病毒併對其進行鑒定.方法 將FMDV VP1基因剋隆到腺病毒的穿梭載體pAdeno Vatotr-CMV5-IRES-GFP中.得到的暘性穿梭質粒經Pme Ⅰ酶線性化後.利用電轉化技術將線性化的暘性質粒與腺病毒骨架載體pAdeno Vator△E1/E3共轉化大腸桿菌BJ5183感受態細胞,使其在大腸桿菌中進行同源重組.將篩選到的重組病毒質粒經Pac-Ⅰ酶線性化後暴露齣包裝信號,通過脂質體LipofectamineTM2000轉染HEK-293A細胞後得到重組病毒.利用報告基因GFP和細胞病變檢測重組病毒滴度和感染效率,通過PCR和westem-blot檢測FMDV VP1基因在重組腺病毒中的錶達.結果 成功構建瞭錶達FMDV VP1基因的重組腺病毒rAd5-VP1,其滴度為1011.87箇TCID50/mL.western-blot檢測重組腺病毒rAd5-VP1能與FMDV暘性血清髮生反應.結論 重組腺病毒rAd5-VP1能與FMDV暘性血清髮生反應,PCR和westem-blot檢測FMDV VP1基因在重組腺病毒中穩定錶達.
목적 구건표체O형구제역병독(Foot-and-Mouth disease Vims,FMDV)VP1기인적중조선병독병대기진행감정.방법 장FMDV VP1기인극륭도선병독적천사재체pAdeno Vatotr-CMV5-IRES-GFP중.득도적양성천사질립경Pme Ⅰ매선성화후.이용전전화기술장선성화적양성질립여선병독골가재체pAdeno Vator△E1/E3공전화대장간균BJ5183감수태세포,사기재대장간균중진행동원중조.장사선도적중조병독질립경Pac-Ⅰ매선성화후폭로출포장신호,통과지질체LipofectamineTM2000전염HEK-293A세포후득도중조병독.이용보고기인GFP화세포병변검측중조병독적도화감염효솔,통과PCR화westem-blot검측FMDV VP1기인재중조선병독중적표체.결과 성공구건료표체FMDV VP1기인적중조선병독rAd5-VP1,기적도위1011.87개TCID50/mL.western-blot검측중조선병독rAd5-VP1능여FMDV양성혈청발생반응.결론 중조선병독rAd5-VP1능여FMDV양성혈청발생반응,PCR화westem-blot검측FMDV VP1기인재중조선병독중은정표체.
