军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2009年
5期
434-437
,共4页
高红伟%田曙光%崔真源%李素波%檀英霞%王璇琳%冉菘余%宫锋
高紅偉%田曙光%崔真源%李素波%檀英霞%王璇琳%冉菘餘%宮鋒
고홍위%전서광%최진원%리소파%단영하%왕선림%염숭여%궁봉
乙酰肝素酶%大肠杆菌%表达优化%蛋白纯化
乙酰肝素酶%大腸桿菌%錶達優化%蛋白純化
을선간소매%대장간균%표체우화%단백순화
目的:表达纯化重组的人乙酰肝素酶 (heparanase,HPA).方法:以表达乙酰肝素酶全长质粒pcDNA3.1-HPA为模板,扩增不包括信号肽的乙酰肝素酶片段,将其插入pET-28a(+)载体,转化到大肠杆菌BL21(plysS,DE3)中,在起始诱导菌密度、诱导温度、诱导时间、诱导剂浓度4个方面对诱导条件进行了优化,实现了重组人乙酰肝素酶的可溶性表达.采用HisTrapTMcrude亲和层析对目的蛋白进行了初步纯化.结果:得到了初步纯化的HPA蛋白,Western 印迹证实表达产物可被乙酰肝素酶抗体和His标签抗体识别,证明表达产物具有乙酰肝素酶的免疫学特性.结论:表达纯化的人HPA蛋白为特异性单抗的制备和鉴定提供了实验材料.
目的:錶達純化重組的人乙酰肝素酶 (heparanase,HPA).方法:以錶達乙酰肝素酶全長質粒pcDNA3.1-HPA為模闆,擴增不包括信號肽的乙酰肝素酶片段,將其插入pET-28a(+)載體,轉化到大腸桿菌BL21(plysS,DE3)中,在起始誘導菌密度、誘導溫度、誘導時間、誘導劑濃度4箇方麵對誘導條件進行瞭優化,實現瞭重組人乙酰肝素酶的可溶性錶達.採用HisTrapTMcrude親和層析對目的蛋白進行瞭初步純化.結果:得到瞭初步純化的HPA蛋白,Western 印跡證實錶達產物可被乙酰肝素酶抗體和His標籤抗體識彆,證明錶達產物具有乙酰肝素酶的免疫學特性.結論:錶達純化的人HPA蛋白為特異性單抗的製備和鑒定提供瞭實驗材料.
목적:표체순화중조적인을선간소매 (heparanase,HPA).방법:이표체을선간소매전장질립pcDNA3.1-HPA위모판,확증불포괄신호태적을선간소매편단,장기삽입pET-28a(+)재체,전화도대장간균BL21(plysS,DE3)중,재기시유도균밀도、유도온도、유도시간、유도제농도4개방면대유도조건진행료우화,실현료중조인을선간소매적가용성표체.채용HisTrapTMcrude친화층석대목적단백진행료초보순화.결과:득도료초보순화적HPA단백,Western 인적증실표체산물가피을선간소매항체화His표첨항체식별,증명표체산물구유을선간소매적면역학특성.결론:표체순화적인HPA단백위특이성단항적제비화감정제공료실험재료.
