军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2009年
5期
431-433,437
,共4页
张兰馨%张书祥%张部昌%马子敏%徐琪寿
張蘭馨%張書祥%張部昌%馬子敏%徐琪壽
장란형%장서상%장부창%마자민%서기수
穿膜肽%融合表达%细胞定位%血脑屏障%基因%tat%细胞膜
穿膜肽%融閤錶達%細胞定位%血腦屏障%基因%tat%細胞膜
천막태%융합표체%세포정위%혈뇌병장%기인%tat%세포막
目的:构建原核表达载体,获得纯化的融合蛋白TAT-GFP,以便于考查TAT的细胞定位及穿膜功能.方法:将TAT基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因串联于原核表达载体pET28a中,通过IPTG诱导融合表达.分离纯化的融合蛋白与BHK-21细胞共孵育一定时间后,激光共聚焦显微镜观察其在细胞内的定位;同时以尾静脉注射方式进行小鼠给药实验,一定时间后麻醉,将主要器官组织取出、固定、冰冻切片,荧光显微镜下观察蛋白的分布情况.结果:DNA测序证明成功构建融合蛋白表达载体pET28a-tat-gfp.经诱导表达、纯化可获得纯度为85%以上的融合蛋白TAT-GFP.细胞实验表明,融合蛋白可迅速透过细胞膜并广泛分布于BHK-21细胞内,其中尤以细胞核内最多,而对照组GFP蛋白则不能穿透细胞膜入胞;动物实验中,给药2 h后即可观察到TAT携带GFP到达小鼠的各主要器官和组织,甚至穿透血脑屏障分布于脑组织部分.结论:融合表达的穿膜肽TAT具有一定的携带生物分子(GFP)穿膜功能,本研究为深入了解TAT的性质及其未来应用奠定了一定的基础.
目的:構建原覈錶達載體,穫得純化的融閤蛋白TAT-GFP,以便于攷查TAT的細胞定位及穿膜功能.方法:將TAT基因與綠色熒光蛋白(GFP)基因串聯于原覈錶達載體pET28a中,通過IPTG誘導融閤錶達.分離純化的融閤蛋白與BHK-21細胞共孵育一定時間後,激光共聚焦顯微鏡觀察其在細胞內的定位;同時以尾靜脈註射方式進行小鼠給藥實驗,一定時間後痳醉,將主要器官組織取齣、固定、冰凍切片,熒光顯微鏡下觀察蛋白的分佈情況.結果:DNA測序證明成功構建融閤蛋白錶達載體pET28a-tat-gfp.經誘導錶達、純化可穫得純度為85%以上的融閤蛋白TAT-GFP.細胞實驗錶明,融閤蛋白可迅速透過細胞膜併廣汎分佈于BHK-21細胞內,其中尤以細胞覈內最多,而對照組GFP蛋白則不能穿透細胞膜入胞;動物實驗中,給藥2 h後即可觀察到TAT攜帶GFP到達小鼠的各主要器官和組織,甚至穿透血腦屏障分佈于腦組織部分.結論:融閤錶達的穿膜肽TAT具有一定的攜帶生物分子(GFP)穿膜功能,本研究為深入瞭解TAT的性質及其未來應用奠定瞭一定的基礎.
목적:구건원핵표체재체,획득순화적융합단백TAT-GFP,이편우고사TAT적세포정위급천막공능.방법:장TAT기인여록색형광단백(GFP)기인천련우원핵표체재체pET28a중,통과IPTG유도융합표체.분리순화적융합단백여BHK-21세포공부육일정시간후,격광공취초현미경관찰기재세포내적정위;동시이미정맥주사방식진행소서급약실험,일정시간후마취,장주요기관조직취출、고정、빙동절편,형광현미경하관찰단백적분포정황.결과:DNA측서증명성공구건융합단백표체재체pET28a-tat-gfp.경유도표체、순화가획득순도위85%이상적융합단백TAT-GFP.세포실험표명,융합단백가신속투과세포막병엄범분포우BHK-21세포내,기중우이세포핵내최다,이대조조GFP단백칙불능천투세포막입포;동물실험중,급약2 h후즉가관찰도TAT휴대GFP도체소서적각주요기관화조직,심지천투혈뇌병장분포우뇌조직부분.결론:융합표체적천막태TAT구유일정적휴대생물분자(GFP)천막공능,본연구위심입료해TAT적성질급기미래응용전정료일정적기출.
