军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2009年
5期
427-430
,共4页
马忠辉%高新%赵巧香%宋海峰
馬忠輝%高新%趙巧香%宋海峰
마충휘%고신%조교향%송해봉
胶质细胞源性神经营养因子%GDNF-TAT基因%电转化%毕赤酵母%血脑屏障%聚合酶链反应
膠質細胞源性神經營養因子%GDNF-TAT基因%電轉化%畢赤酵母%血腦屏障%聚閤酶鏈反應
효질세포원성신경영양인자%GDNF-TAT기인%전전화%필적효모%혈뇌병장%취합매련반응
目的:在毕赤酵母中表达带有TAT多肽的人胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor, GDNF),为探讨GDNF-TAT用于帕金森病的治疗奠定基础.方法:用密码子优化法合成人GDNF基因序列连在pPICZαA,用PCR方法分别在上游引入TAT位点与XbaⅠ酶切位点,下游设计扩增pPICZαA上的α-因子序列.然后插入pPICZαA载体中,转化大肠杆菌TOP10,筛选阳性克隆,对其进行PCR和双酶切并测序鉴定,构建GDNF-TAT在毕赤酵母表达质粒pPICZαA-GDNF-TAT.电击转化毕赤酵母GS115,对阳性克隆进行诱导表达后经SDS-PAGE和Western印迹鉴定目的蛋白.结果:双酶切pPICZαA-GDNF-TAT后,琼脂糖电泳可分别见到大小约为3.1 kb和432 bp片段,表明目的片段已插入载体中,经序列测定其含有完整的GDNF-TAT基因片段,Western 印迹结果显示含有pPICZαA-GDNF-TAT的毕赤酵母GS115能分泌表达GDNF-TAT.结论:成功构建了毕赤酵母表达载体pPICZαA-GDNF-TAT,并能在毕赤酵母GS115中分泌表达GDNF-TAT.
目的:在畢赤酵母中錶達帶有TAT多肽的人膠質細胞源性神經營養因子(glial cell line-derived neurotrophic factor, GDNF),為探討GDNF-TAT用于帕金森病的治療奠定基礎.方法:用密碼子優化法閤成人GDNF基因序列連在pPICZαA,用PCR方法分彆在上遊引入TAT位點與XbaⅠ酶切位點,下遊設計擴增pPICZαA上的α-因子序列.然後插入pPICZαA載體中,轉化大腸桿菌TOP10,篩選暘性剋隆,對其進行PCR和雙酶切併測序鑒定,構建GDNF-TAT在畢赤酵母錶達質粒pPICZαA-GDNF-TAT.電擊轉化畢赤酵母GS115,對暘性剋隆進行誘導錶達後經SDS-PAGE和Western印跡鑒定目的蛋白.結果:雙酶切pPICZαA-GDNF-TAT後,瓊脂糖電泳可分彆見到大小約為3.1 kb和432 bp片段,錶明目的片段已插入載體中,經序列測定其含有完整的GDNF-TAT基因片段,Western 印跡結果顯示含有pPICZαA-GDNF-TAT的畢赤酵母GS115能分泌錶達GDNF-TAT.結論:成功構建瞭畢赤酵母錶達載體pPICZαA-GDNF-TAT,併能在畢赤酵母GS115中分泌錶達GDNF-TAT.
목적:재필적효모중표체대유TAT다태적인효질세포원성신경영양인자(glial cell line-derived neurotrophic factor, GDNF),위탐토GDNF-TAT용우파금삼병적치료전정기출.방법:용밀마자우화법합성인GDNF기인서렬련재pPICZαA,용PCR방법분별재상유인입TAT위점여XbaⅠ매절위점,하유설계확증pPICZαA상적α-인자서렬.연후삽입pPICZαA재체중,전화대장간균TOP10,사선양성극륭,대기진행PCR화쌍매절병측서감정,구건GDNF-TAT재필적효모표체질립pPICZαA-GDNF-TAT.전격전화필적효모GS115,대양성극륭진행유도표체후경SDS-PAGE화Western인적감정목적단백.결과:쌍매절pPICZαA-GDNF-TAT후,경지당전영가분별견도대소약위3.1 kb화432 bp편단,표명목적편단이삽입재체중,경서렬측정기함유완정적GDNF-TAT기인편단,Western 인적결과현시함유pPICZαA-GDNF-TAT적필적효모GS115능분비표체GDNF-TAT.결론:성공구건료필적효모표체재체pPICZαA-GDNF-TAT,병능재필적효모GS115중분비표체GDNF-TAT.
