军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2009年
5期
409-411,485
,共4页
李玉蕾%颜玲娣%李素燕%温泉%宫泽辉
李玉蕾%顏玲娣%李素燕%溫泉%宮澤輝
리옥뢰%안령제%리소연%온천%궁택휘
阿片受体样受体%CHO细胞%转染%放射性配体-受体结合
阿片受體樣受體%CHO細胞%轉染%放射性配體-受體結閤
아편수체양수체%CHO세포%전염%방사성배체-수체결합
目的:在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞上稳定转染人重组阿片受体样受体(hORL1),为体外高通量筛选hORL1受体作用药物及相关药物分子机制研究奠定基础.方法:用脂质体介导法将pcDNA3.1(+)-hORL1重组质粒稳定转染到缺乏hORL1的CHO细胞中,然后用含G418的选择性培养液进行筛选,挑取耐药克隆;用放射性配体-受体结合实验进一步筛选阳性克隆,对阳性克隆受体亲和力和表达量进行分析,用[35S]GTPγS结合实验分析表达受体的功能.结果与结论:在稳定转染hORL1的克隆细胞中,[3H]伤害感受肽的Kd和Bmax值分别为(0.44±0.21)nmol/L和(0.35±0.06)pmol/mg蛋白.伤害感受肽刺激受体结合[35S]GTPγS的EC50值为3.45 nmol/L.以上结果与文献报道的天然hORL1受体的特性相似,说明该细胞株表达的hORL1受体与天然的hORL1受体具有基本一致的生物学特性,证实成功建立了稳定表达人阿片受体样受体的细胞模型.
目的:在中國倉鼠卵巢(CHO)細胞上穩定轉染人重組阿片受體樣受體(hORL1),為體外高通量篩選hORL1受體作用藥物及相關藥物分子機製研究奠定基礎.方法:用脂質體介導法將pcDNA3.1(+)-hORL1重組質粒穩定轉染到缺乏hORL1的CHO細胞中,然後用含G418的選擇性培養液進行篩選,挑取耐藥剋隆;用放射性配體-受體結閤實驗進一步篩選暘性剋隆,對暘性剋隆受體親和力和錶達量進行分析,用[35S]GTPγS結閤實驗分析錶達受體的功能.結果與結論:在穩定轉染hORL1的剋隆細胞中,[3H]傷害感受肽的Kd和Bmax值分彆為(0.44±0.21)nmol/L和(0.35±0.06)pmol/mg蛋白.傷害感受肽刺激受體結閤[35S]GTPγS的EC50值為3.45 nmol/L.以上結果與文獻報道的天然hORL1受體的特性相似,說明該細胞株錶達的hORL1受體與天然的hORL1受體具有基本一緻的生物學特性,證實成功建立瞭穩定錶達人阿片受體樣受體的細胞模型.
목적:재중국창서란소(CHO)세포상은정전염인중조아편수체양수체(hORL1),위체외고통량사선hORL1수체작용약물급상관약물분자궤제연구전정기출.방법:용지질체개도법장pcDNA3.1(+)-hORL1중조질립은정전염도결핍hORL1적CHO세포중,연후용함G418적선택성배양액진행사선,도취내약극륭;용방사성배체-수체결합실험진일보사선양성극륭,대양성극륭수체친화력화표체량진행분석,용[35S]GTPγS결합실험분석표체수체적공능.결과여결론:재은정전염hORL1적극륭세포중,[3H]상해감수태적Kd화Bmax치분별위(0.44±0.21)nmol/L화(0.35±0.06)pmol/mg단백.상해감수태자격수체결합[35S]GTPγS적EC50치위3.45 nmol/L.이상결과여문헌보도적천연hORL1수체적특성상사,설명해세포주표체적hORL1수체여천연적hORL1수체구유기본일치적생물학특성,증실성공건립료은정표체인아편수체양수체적세포모형.
