北京大学学报（医学版）
北京大學學報（醫學版）
북경대학학보（의학판）
JOURNAL OF BEIJING MEDICAL UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2009年
5期
565-570
,共6页
曾百进%余日月%周永胜%徐军%倪永伟%刘云松%许永伟
曾百進%餘日月%週永勝%徐軍%倪永偉%劉雲鬆%許永偉
증백진%여일월%주영성%서군%예영위%류운송%허영위
肿瘤坏死因子α%脂肪组织%间质细胞%血管生成诱导剂
腫瘤壞死因子α%脂肪組織%間質細胞%血管生成誘導劑
종류배사인자α%지방조직%간질세포%혈관생성유도제
目的:研究在重组人肿瘤坏死因子(recombinant human tumor necrosis factor alpha,rhTNF-α)刺激下人脂肪基质细胞(human adipose tissue-derived stromal cells,hADSCs)增殖的改变及成骨向分化前后血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、成纤维细胞生长因子2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)和胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)分泌的变化.方法:采用吸脂术获得的第4代hADSCs,以终浓度为O、1、5、10、50、100μg/L的rhTNF-α刺激hADSCs,分别在48、72、96 h后行MTT法检测不同浓度rhTNF-α对hADSCs增殖的影响;并以该浓度梯度的rhTNF-α刺激hADSCs,24 h后收集卜清,以ELISA法检测VEGF、FGF-2和IGF-1的分泌情况;在成骨向诱导的第1、3、7、14天收集细胞上清,ELISA法检测上述3种生长因子分泌的变化,收集细胞卜清前24 h更换培养基,并在相应孔中加入rhTNF-α,使其终浓度为10μg/L.所有ELISA数据均以相应培养孔的细胞数进行校正.结果:rhTNF-α能促进hADSCs的增殖,其作用表现为一定的浓度和时间依赖.相比于对照组,48 h时,10μg/L rhTNF-α对增殖的促进作用并不明显,但96 h时则表现为促进作用(P<0.01),而100 μg/L rhTNF-α在48 h表现为抑制作用(P<0.01),96 h时则表现为明显的促进作用(P<0.01).相对于对照组,rhTNF-α可以显著促进hADSCs分泌VEGF、FGF-2和IGF-1(P<0.01);hADSCs经成骨向诱导后,上述3种生长因子的分泌有增加的趋势;不同成骨向分化阶段的hADSCs用10μg/L rhTNF-α刺激后,在诱导第1天,rhTNF-α显著促进VEGF的分泌(P<0.01),但对FGF-2和IGF-1的分泌无显著性影响;在诱导第3天和第7天,rhTNF-α对VEGF(P<0.01)、FGF-2(P<0.05)和IGF-1(P<0.05)的分泌均有促进作用;但在第14天则抑制VEGF(P<0.01)、FGF-2(P<0.05)和IGF(P<0.05)的分泌.结论:一定浓度的rhTNF-α对hADSCs的增殖有促进作用;hADSCs分泌VEGF、FGF-2和IGF-1具有rhTNF-α的浓度依赖;在不同成骨向分化阶段,rhTNF-α对hADSCs分泌VEGF、FGF-2和IGF-1这3种生长因子的作用不同.
目的:研究在重組人腫瘤壞死因子(recombinant human tumor necrosis factor alpha,rhTNF-α)刺激下人脂肪基質細胞(human adipose tissue-derived stromal cells,hADSCs)增殖的改變及成骨嚮分化前後血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、成纖維細胞生長因子2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)和胰島素樣生長因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)分泌的變化.方法:採用吸脂術穫得的第4代hADSCs,以終濃度為O、1、5、10、50、100μg/L的rhTNF-α刺激hADSCs,分彆在48、72、96 h後行MTT法檢測不同濃度rhTNF-α對hADSCs增殖的影響;併以該濃度梯度的rhTNF-α刺激hADSCs,24 h後收集蔔清,以ELISA法檢測VEGF、FGF-2和IGF-1的分泌情況;在成骨嚮誘導的第1、3、7、14天收集細胞上清,ELISA法檢測上述3種生長因子分泌的變化,收集細胞蔔清前24 h更換培養基,併在相應孔中加入rhTNF-α,使其終濃度為10μg/L.所有ELISA數據均以相應培養孔的細胞數進行校正.結果:rhTNF-α能促進hADSCs的增殖,其作用錶現為一定的濃度和時間依賴.相比于對照組,48 h時,10μg/L rhTNF-α對增殖的促進作用併不明顯,但96 h時則錶現為促進作用(P<0.01),而100 μg/L rhTNF-α在48 h錶現為抑製作用(P<0.01),96 h時則錶現為明顯的促進作用(P<0.01).相對于對照組,rhTNF-α可以顯著促進hADSCs分泌VEGF、FGF-2和IGF-1(P<0.01);hADSCs經成骨嚮誘導後,上述3種生長因子的分泌有增加的趨勢;不同成骨嚮分化階段的hADSCs用10μg/L rhTNF-α刺激後,在誘導第1天,rhTNF-α顯著促進VEGF的分泌(P<0.01),但對FGF-2和IGF-1的分泌無顯著性影響;在誘導第3天和第7天,rhTNF-α對VEGF(P<0.01)、FGF-2(P<0.05)和IGF-1(P<0.05)的分泌均有促進作用;但在第14天則抑製VEGF(P<0.01)、FGF-2(P<0.05)和IGF(P<0.05)的分泌.結論:一定濃度的rhTNF-α對hADSCs的增殖有促進作用;hADSCs分泌VEGF、FGF-2和IGF-1具有rhTNF-α的濃度依賴;在不同成骨嚮分化階段,rhTNF-α對hADSCs分泌VEGF、FGF-2和IGF-1這3種生長因子的作用不同.
목적:연구재중조인종류배사인자(recombinant human tumor necrosis factor alpha,rhTNF-α)자격하인지방기질세포(human adipose tissue-derived stromal cells,hADSCs)증식적개변급성골향분화전후혈관내피생장인자(vascular endothelial growth factor,VEGF)、성섬유세포생장인자2(fibroblast growth factor-2,FGF-2)화이도소양생장인자1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)분비적변화.방법:채용흡지술획득적제4대hADSCs,이종농도위O、1、5、10、50、100μg/L적rhTNF-α자격hADSCs,분별재48、72、96 h후행MTT법검측불동농도rhTNF-α대hADSCs증식적영향;병이해농도제도적rhTNF-α자격hADSCs,24 h후수집복청,이ELISA법검측VEGF、FGF-2화IGF-1적분비정황;재성골향유도적제1、3、7、14천수집세포상청,ELISA법검측상술3충생장인자분비적변화,수집세포복청전24 h경환배양기,병재상응공중가입rhTNF-α,사기종농도위10μg/L.소유ELISA수거균이상응배양공적세포수진행교정.결과:rhTNF-α능촉진hADSCs적증식,기작용표현위일정적농도화시간의뢰.상비우대조조,48 h시,10μg/L rhTNF-α대증식적촉진작용병불명현,단96 h시칙표현위촉진작용(P<0.01),이100 μg/L rhTNF-α재48 h표현위억제작용(P<0.01),96 h시칙표현위명현적촉진작용(P<0.01).상대우대조조,rhTNF-α가이현저촉진hADSCs분비VEGF、FGF-2화IGF-1(P<0.01);hADSCs경성골향유도후,상술3충생장인자적분비유증가적추세;불동성골향분화계단적hADSCs용10μg/L rhTNF-α자격후,재유도제1천,rhTNF-α현저촉진VEGF적분비(P<0.01),단대FGF-2화IGF-1적분비무현저성영향;재유도제3천화제7천,rhTNF-α대VEGF(P<0.01)、FGF-2(P<0.05)화IGF-1(P<0.05)적분비균유촉진작용;단재제14천칙억제VEGF(P<0.01)、FGF-2(P<0.05)화IGF(P<0.05)적분비.결론:일정농도적rhTNF-α대hADSCs적증식유촉진작용;hADSCs분비VEGF、FGF-2화IGF-1구유rhTNF-α적농도의뢰;재불동성골향분화계단,rhTNF-α대hADSCs분비VEGF、FGF-2화IGF-1저3충생장인자적작용불동.
