北京大学学报（医学版）
北京大學學報（醫學版）
북경대학학보（의학판）
JOURNAL OF BEIJING MEDICAL UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2009年
5期
516-520
,共5页
李伟军%邢晓芳%曲立科%孟麟%寿成超
李偉軍%邢曉芳%麯立科%孟麟%壽成超
리위군%형효방%곡립과%맹린%수성초
蛋白质酪氨酸磷酸酶%肿瘤%点突变%基因缺失
蛋白質酪氨痠燐痠酶%腫瘤%點突變%基因缺失
단백질락안산린산매%종류%점돌변%기인결실
目的:分别构建肝再生磷酸酶-3(phosphatase of regenerating liver 3,PRL-3)基因C104S位点突变和C端CAAX缺失的myc标签和GFP荧光标签重组质粒pcDNA3-myc-PRL-3(C104S)、pEGFP-PRL-3(C104S)、peDNA3-myc-PRL-3(△CAAX)和pEGFP-PRL-3(△CAAX),并进行真核表达,为PRL-3的后续功能研究提供有效的工具.方法:设计PRL-3基因C104S点突变、c端CAAX缺失的特异性引物,以peDNA3-myc-PRL-3质粒为模板,通过基因克隆、一步法点突变的方法构建各重组质粒,通过酶切和测序鉴定后转染真核细胞,检测其在细胞中的表达并观察定位情况.结果:成功构建了4种重组质粒,并能在结肠癌细胞LoVo中表达.用激光共聚焦扫描显微镜对细胞中绿色荧光融合蛋白的定位观察发现,当PRL-3的CAAX位点缺失后,PRL-3由内膜系统大量入核,与理论预期相符.结论:获得了PRL-3基因C104S位点突变体和CAAX缺失体重组真核表达质粒并能在细胞中表达,为进一步研究PRL-3的功能提供了条件.
目的:分彆構建肝再生燐痠酶-3(phosphatase of regenerating liver 3,PRL-3)基因C104S位點突變和C耑CAAX缺失的myc標籤和GFP熒光標籤重組質粒pcDNA3-myc-PRL-3(C104S)、pEGFP-PRL-3(C104S)、peDNA3-myc-PRL-3(△CAAX)和pEGFP-PRL-3(△CAAX),併進行真覈錶達,為PRL-3的後續功能研究提供有效的工具.方法:設計PRL-3基因C104S點突變、c耑CAAX缺失的特異性引物,以peDNA3-myc-PRL-3質粒為模闆,通過基因剋隆、一步法點突變的方法構建各重組質粒,通過酶切和測序鑒定後轉染真覈細胞,檢測其在細胞中的錶達併觀察定位情況.結果:成功構建瞭4種重組質粒,併能在結腸癌細胞LoVo中錶達.用激光共聚焦掃描顯微鏡對細胞中綠色熒光融閤蛋白的定位觀察髮現,噹PRL-3的CAAX位點缺失後,PRL-3由內膜繫統大量入覈,與理論預期相符.結論:穫得瞭PRL-3基因C104S位點突變體和CAAX缺失體重組真覈錶達質粒併能在細胞中錶達,為進一步研究PRL-3的功能提供瞭條件.
목적:분별구건간재생린산매-3(phosphatase of regenerating liver 3,PRL-3)기인C104S위점돌변화C단CAAX결실적myc표첨화GFP형광표첨중조질립pcDNA3-myc-PRL-3(C104S)、pEGFP-PRL-3(C104S)、peDNA3-myc-PRL-3(△CAAX)화pEGFP-PRL-3(△CAAX),병진행진핵표체,위PRL-3적후속공능연구제공유효적공구.방법:설계PRL-3기인C104S점돌변、c단CAAX결실적특이성인물,이peDNA3-myc-PRL-3질립위모판,통과기인극륭、일보법점돌변적방법구건각중조질립,통과매절화측서감정후전염진핵세포,검측기재세포중적표체병관찰정위정황.결과:성공구건료4충중조질립,병능재결장암세포LoVo중표체.용격광공취초소묘현미경대세포중록색형광융합단백적정위관찰발현,당PRL-3적CAAX위점결실후,PRL-3유내막계통대량입핵,여이론예기상부.결론:획득료PRL-3기인C104S위점돌변체화CAAX결실체중조진핵표체질립병능재세포중표체,위진일보연구PRL-3적공능제공료조건.
