安徽农业科学
安徽農業科學
안휘농업과학
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES
2009年
11期
4920-4922
,共3页
彭媛媛%付小哲%石存斌%余露军%李宁求%吴淑勤
彭媛媛%付小哲%石存斌%餘露軍%李寧求%吳淑勤
팽원원%부소철%석존빈%여로군%리저구%오숙근
传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)%表达%纯化%抗体
傳染性脾腎壞死病毒(ISKNV)%錶達%純化%抗體
전염성비신배사병독(ISKNV)%표체%순화%항체
Infectious spleen and kidney necrosis virus(ISKNV)%Expression%Purification%Antibody
[目的]构建传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)ORF086基因的融合表达载体,制备抗体为进一步研究ORF086蛋白的免疫保护性提供前提条件. [方法]PCR扩增目的基因,构建重组质粒,经酶切鉴定,PCR和核酸序列分析后,IPTG诱导表达,Ni-柱纯化,注射新西兰白兔获得抗血清. [结果]扩增出ORF086基因,成功构建了重组质粒pET32a-ORF086,SDS-PAGE电泳和Western-blot分析显示,获得一条36.0 kD的融合蛋白.[结论] 成功构建了原核表达载体,融合蛋白主要以包涵体的形式存在,经柱层析纯化蛋白,纯度达90%以上.
[目的]構建傳染性脾腎壞死病毒(ISKNV)ORF086基因的融閤錶達載體,製備抗體為進一步研究ORF086蛋白的免疫保護性提供前提條件. [方法]PCR擴增目的基因,構建重組質粒,經酶切鑒定,PCR和覈痠序列分析後,IPTG誘導錶達,Ni-柱純化,註射新西蘭白兔穫得抗血清. [結果]擴增齣ORF086基因,成功構建瞭重組質粒pET32a-ORF086,SDS-PAGE電泳和Western-blot分析顯示,穫得一條36.0 kD的融閤蛋白.[結論] 成功構建瞭原覈錶達載體,融閤蛋白主要以包涵體的形式存在,經柱層析純化蛋白,純度達90%以上.
[목적]구건전염성비신배사병독(ISKNV)ORF086기인적융합표체재체,제비항체위진일보연구ORF086단백적면역보호성제공전제조건. [방법]PCR확증목적기인,구건중조질립,경매절감정,PCR화핵산서렬분석후,IPTG유도표체,Ni-주순화,주사신서란백토획득항혈청. [결과]확증출ORF086기인,성공구건료중조질립pET32a-ORF086,SDS-PAGE전영화Western-blot분석현시,획득일조36.0 kD적융합단백.[결론] 성공구건료원핵표체재체,융합단백주요이포함체적형식존재,경주층석순화단백,순도체90%이상.
