CAJ | 학술논문

目的:构建人肝细胞生长因子(hHGF)与肝再生增强因子(hALR)融合基因的真核表达质粒并进行鉴定,为促肝细胞再生研究奠定实验基础.方法:首先分别以重组质粒pUC18-hHGF和Puc18-hALR为模板,进行PCR扩增,获得hHGF和hALR的基因序列,然后利用重叠延伸PCR方法将获得的基因序列通过一个连接序列进行连接,构建融合基因hHGF/hALR.最后将融合基因定向插入到真核表达质粒pcDNA3.1的Nhe I和Xba I酶切住点之间,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-hHGF/hALR,并进行双酶切及测序鉴定.结果:hHGF和hALR的PCR扩增产物电泳后分别观察到2.2 kb和0.4kb的单一DNA条带,与理论值相符.重叠延伸PCR扩增后的融合基因产物电泳后观察到2.6kb的单一DNA条带,与预期值一致.重组真核表达质粒pcDNA3.1-hHGF/hALR经双酶切,电泳后观察到2.6 kb和5.4kb的两条DNA条带,与预期值相符,测序鉴定结果表明序列正确.结论:成功构建了hHGF与hALR融合基因的真核表达质粒,为促肝细胞再生研究奠定实验基础.
목적:구건인간세포생장인자(hHGF)여간재생증강인자(hALR)융합기인적진핵표체질립병진행감정,위촉간세포재생연구전정실험기출.방법:수선분별이중조질립pUC18-hHGF화Puc18-hALR위모판,진행PCR확증,획득hHGF화hALR적기인서렬,연후이용중첩연신PCR방법장획득적기인서렬통과일개련접서렬진행련접,구건융합기인hHGF/hALR.최후장융합기인정향삽입도진핵표체질립pcDNA3.1적Nhe I화Xba I매절주점지간,구건중조진핵표체질립pcDNA3.1-hHGF/hALR,병진행쌍매절급측서감정.결과:hHGF화hALR적PCR확증산물전영후분별관찰도2.2 kb화0.4kb적단일DNA조대,여이론치상부.중첩연신PCR확증후적융합기인산물전영후관찰도2.6kb적단일DNA조대,여예기치일치.중조진핵표체질립pcDNA3.1-hHGF/hALR경쌍매절,전영후관찰도2.6 kb화5.4kb적량조DNA조대,여예기치상부,측서감정결과표명서렬정학.결론:성공구건료hHGF여hALR융합기인적진핵표체질립,위촉간세포재생연구전정실험기출.