中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2014年
1期
35-40
,共6页
谢青%陈林林%李治%单晓亮%聂丹%段玉洁%权会琴%唐霓
謝青%陳林林%李治%單曉亮%聶丹%段玉潔%權會琴%唐霓
사청%진림림%리치%단효량%섭단%단옥길%권회금%당예
乙型肝炎病毒X蛋白%截短突变体%细胞内定位%转录活性
乙型肝炎病毒X蛋白%截短突變體%細胞內定位%轉錄活性
을형간염병독X단백%절단돌변체%세포내정위%전록활성
Hepatitis B virus X protein%Truncated mutants%Intracellular location%Transcriptional activity
目的:观察乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)截短突变体在细胞内的定位及其对Wnt/β-catenin信号通路转录活性的影响.方法:采用PCR克隆全长野生型HBx基因,在此基础上,分别构建融合增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因和缺失HBx基因C端49～154aa、C端85～154 aa、N端1～57 aa+C端141～154 aa、N端1～57 aa或N端1～84 aa截短突变体的表达载体;激光共聚焦显微镜下观察HBx截短突变体在HEK293细胞中的定位;采用萤光素酶报告系统检测HBx截短突变体对Wnt/β-catenin信号通路转录活性的影响.结果:(1)成功构建了HBx截短突变体与EGFP基因融合的表达载体.(2)野生型HBx及截短突变体在HEK293细胞中具有不同的定位,其中N端缺失突变体主要定位于细胞核周胞质;C端缺失突变体在胞质胞核中呈均匀分布;N端+C端缺失突变体的定位类似于野生型HBx,主要定位于胞质,呈不均一的粗大颗粒,胞核中也有少量表达.(3)与野生型HBx相比,HBx C端49 ～154 aa、C端85～154 aa、N端1～57 aa+C端141～154aa、N端1～57 aa和N端1～84 aa缺失突变体在Huh7细胞中均使Wnt/β-catenin信号通路的转录活性明显下降,分别下降了78.7％、84.7％、75.7％、93.8％和95.5％.结论:HBx不同截短突变体的细胞定位及对Wnt/β-catenin信号通路转录活性不同,提示HBx的不同功能区对Wnt信号的转录激活发挥着不同的作用.
目的:觀察乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)截短突變體在細胞內的定位及其對Wnt/β-catenin信號通路轉錄活性的影響.方法:採用PCR剋隆全長野生型HBx基因,在此基礎上,分彆構建融閤增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)基因和缺失HBx基因C耑49～154aa、C耑85～154 aa、N耑1～57 aa+C耑141～154 aa、N耑1～57 aa或N耑1～84 aa截短突變體的錶達載體;激光共聚焦顯微鏡下觀察HBx截短突變體在HEK293細胞中的定位;採用螢光素酶報告繫統檢測HBx截短突變體對Wnt/β-catenin信號通路轉錄活性的影響.結果:(1)成功構建瞭HBx截短突變體與EGFP基因融閤的錶達載體.(2)野生型HBx及截短突變體在HEK293細胞中具有不同的定位,其中N耑缺失突變體主要定位于細胞覈週胞質;C耑缺失突變體在胞質胞覈中呈均勻分佈;N耑+C耑缺失突變體的定位類似于野生型HBx,主要定位于胞質,呈不均一的粗大顆粒,胞覈中也有少量錶達.(3)與野生型HBx相比,HBx C耑49 ～154 aa、C耑85～154 aa、N耑1～57 aa+C耑141～154aa、N耑1～57 aa和N耑1～84 aa缺失突變體在Huh7細胞中均使Wnt/β-catenin信號通路的轉錄活性明顯下降,分彆下降瞭78.7％、84.7％、75.7％、93.8％和95.5％.結論:HBx不同截短突變體的細胞定位及對Wnt/β-catenin信號通路轉錄活性不同,提示HBx的不同功能區對Wnt信號的轉錄激活髮揮著不同的作用.
목적:관찰을형간염병독X단백(HBx)절단돌변체재세포내적정위급기대Wnt/β-catenin신호통로전록활성적영향.방법:채용PCR극륭전장야생형HBx기인,재차기출상,분별구건융합증강형록색형광단백(EGFP)기인화결실HBx기인C단49～154aa、C단85～154 aa、N단1～57 aa+C단141～154 aa、N단1～57 aa혹N단1～84 aa절단돌변체적표체재체;격광공취초현미경하관찰HBx절단돌변체재HEK293세포중적정위;채용형광소매보고계통검측HBx절단돌변체대Wnt/β-catenin신호통로전록활성적영향.결과:(1)성공구건료HBx절단돌변체여EGFP기인융합적표체재체.(2)야생형HBx급절단돌변체재HEK293세포중구유불동적정위,기중N단결실돌변체주요정위우세포핵주포질;C단결실돌변체재포질포핵중정균균분포;N단+C단결실돌변체적정위유사우야생형HBx,주요정위우포질,정불균일적조대과립,포핵중야유소량표체.(3)여야생형HBx상비,HBx C단49 ～154 aa、C단85～154 aa、N단1～57 aa+C단141～154aa、N단1～57 aa화N단1～84 aa결실돌변체재Huh7세포중균사Wnt/β-catenin신호통로적전록활성명현하강,분별하강료78.7％、84.7％、75.7％、93.8％화95.5％.결론:HBx불동절단돌변체적세포정위급대Wnt/β-catenin신호통로전록활성불동,제시HBx적불동공능구대Wnt신호적전록격활발휘착불동적작용.
