口腔颌面外科杂志
口腔頜麵外科雜誌
구강합면외과잡지
CHINESE JOURNAL OF ORAL AND MAXILLOFACIAL SURGERY
2012年
5期
323-327
,共5页
王瀛%张凯%邹多宏%何家才%王元银%周健
王瀛%張凱%鄒多宏%何傢纔%王元銀%週健
왕영%장개%추다굉%하가재%왕원은%주건
低氧诱导因子1α%慢病毒载体%骨髓间充质干细胞
低氧誘導因子1α%慢病毒載體%骨髓間充質榦細胞
저양유도인자1α%만병독재체%골수간충질간세포
目的:构建低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的慢病毒载体(Lenti-HIF-1α),转染骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)后,检测HIF-1α在BMSCs内的表达,并鉴定其位置.方法:根据人的HIF-1α基因(NM_001530)序列行引物设计及序列片段的PCR扩增,将目的基因PCR产物连接到载体pEGFP-N1上,构建真核表达载体pEGFP-N1-HIF-1 α.将目的基因PCR产物和目的载体用NheI和BamHI分别进行酶切,对质粒进行鉴定.采用LR重组系统将目的序列重组到慢病毒载体plenti6.3V5-DEST上,构建慢病毒载体Lenti-HIF-1α (Lenti-LacZ为对照组).检测慢病毒滴度后,转染BMSCs,检测目的基因的表达.通过细胞免疫组织化学法观察HIF-1α在BMSCs内的位置.结果:通过对构建质粒克隆进行测序及酶切,证实真核表达载体pEGFP-N1-HIF-1α构建成功.用Lenti-HIF-1α转染BMSCs细胞,0、1、4、7、14和21 d后qPCR检测.结果表明HIF-1α在转染后的第4天开始有明显的过表达,且持续到第21天.细胞免疫组织化学结果显示目的基因位于BMSCs的核内.结论:成功构建了慢病毒载体Lenti-HIF-1α,且转染的目的基因位于BMSCs细胞核内,为HIF-1α介导的BMSCs进行体内实验研究奠定了基础.
目的:構建低氧誘導因子-1α(HIF-1α)的慢病毒載體(Lenti-HIF-1α),轉染骨髓基質榦細胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)後,檢測HIF-1α在BMSCs內的錶達,併鑒定其位置.方法:根據人的HIF-1α基因(NM_001530)序列行引物設計及序列片段的PCR擴增,將目的基因PCR產物連接到載體pEGFP-N1上,構建真覈錶達載體pEGFP-N1-HIF-1 α.將目的基因PCR產物和目的載體用NheI和BamHI分彆進行酶切,對質粒進行鑒定.採用LR重組繫統將目的序列重組到慢病毒載體plenti6.3V5-DEST上,構建慢病毒載體Lenti-HIF-1α (Lenti-LacZ為對照組).檢測慢病毒滴度後,轉染BMSCs,檢測目的基因的錶達.通過細胞免疫組織化學法觀察HIF-1α在BMSCs內的位置.結果:通過對構建質粒剋隆進行測序及酶切,證實真覈錶達載體pEGFP-N1-HIF-1α構建成功.用Lenti-HIF-1α轉染BMSCs細胞,0、1、4、7、14和21 d後qPCR檢測.結果錶明HIF-1α在轉染後的第4天開始有明顯的過錶達,且持續到第21天.細胞免疫組織化學結果顯示目的基因位于BMSCs的覈內.結論:成功構建瞭慢病毒載體Lenti-HIF-1α,且轉染的目的基因位于BMSCs細胞覈內,為HIF-1α介導的BMSCs進行體內實驗研究奠定瞭基礎.
목적:구건저양유도인자-1α(HIF-1α)적만병독재체(Lenti-HIF-1α),전염골수기질간세포(bone marrow stromal cells,BMSCs)후,검측HIF-1α재BMSCs내적표체,병감정기위치.방법:근거인적HIF-1α기인(NM_001530)서렬행인물설계급서렬편단적PCR확증,장목적기인PCR산물련접도재체pEGFP-N1상,구건진핵표체재체pEGFP-N1-HIF-1 α.장목적기인PCR산물화목적재체용NheI화BamHI분별진행매절,대질립진행감정.채용LR중조계통장목적서렬중조도만병독재체plenti6.3V5-DEST상,구건만병독재체Lenti-HIF-1α (Lenti-LacZ위대조조).검측만병독적도후,전염BMSCs,검측목적기인적표체.통과세포면역조직화학법관찰HIF-1α재BMSCs내적위치.결과:통과대구건질립극륭진행측서급매절,증실진핵표체재체pEGFP-N1-HIF-1α구건성공.용Lenti-HIF-1α전염BMSCs세포,0、1、4、7、14화21 d후qPCR검측.결과표명HIF-1α재전염후적제4천개시유명현적과표체,차지속도제21천.세포면역조직화학결과현시목적기인위우BMSCs적핵내.결론:성공구건료만병독재체Lenti-HIF-1α,차전염적목적기인위우BMSCs세포핵내,위HIF-1α개도적BMSCs진행체내실험연구전정료기출.
