继续医学教育
繼續醫學教育
계속의학교육
CONTINUING MEDICAL EDUCATION
2009年
4期
36-39
,共4页
张晔%杜智%张金卷%朱争艳%李涛%高英堂%杨斌
張曄%杜智%張金捲%硃爭豔%李濤%高英堂%楊斌
장엽%두지%장금권%주쟁염%리도%고영당%양빈
肝干细胞%细胞分离%细胞鉴定%免疫细胞化学
肝榦細胞%細胞分離%細胞鑒定%免疫細胞化學
간간세포%세포분리%세포감정%면역세포화학
目的:分离、鉴定人胎肝中肝干细胞并短期培养,为体外扩增及诱导分化实验提供细胞来源.方法:采用原位两步胶原酶灌注结合Percoll液密度梯度离心的方法分离、纯化胎肝中肝干细胞,用光镜、电镜观察所得细胞形态,通过免疫细胞化学染色检测细胞AFP、CK19、CD34.测量肝脏重量及获得的肝千细胞数量,计算肝干细胞产量,对肝干细胞进行短期培养.结果:两步胶原酶灌注可有效消化胎儿肝脏结缔组织,分离的肝脏细胞经不连续Percoll密度梯度离心,可得到肝干细胞,细胞活性率为(88.35±2.45)%(n=30).光镜下肝干细胞呈卵圆形,直径约为成熟肝细胞的1/3,电镜下肝干细胞直径约10μm,细胞大部分被卵圆形细胞核所占据,细胞质少,核浆比例大,内质网、线粒体、高尔基体等细胞器不发达.ABC法免疫细胞化学染色显示:胎儿肝干细胞CK19、CD34及AFP呈阳性信号.对肝干细胞进行培养,12 h后肝干细胞逐渐粘附、贴壁、铺展,呈现为圆形、椭圆形,呈上皮细胞样平铺生长.肝干细胞产量为(8.76±0.46)×105个/g(n=15).结论:两步胶原酶灌注结合不连续Percoll液密度梯度离心法可较好地分离纯化胎儿肝干细胞,所得细胞可体外培养,可做为进一步实验的材料.
目的:分離、鑒定人胎肝中肝榦細胞併短期培養,為體外擴增及誘導分化實驗提供細胞來源.方法:採用原位兩步膠原酶灌註結閤Percoll液密度梯度離心的方法分離、純化胎肝中肝榦細胞,用光鏡、電鏡觀察所得細胞形態,通過免疫細胞化學染色檢測細胞AFP、CK19、CD34.測量肝髒重量及穫得的肝韆細胞數量,計算肝榦細胞產量,對肝榦細胞進行短期培養.結果:兩步膠原酶灌註可有效消化胎兒肝髒結締組織,分離的肝髒細胞經不連續Percoll密度梯度離心,可得到肝榦細胞,細胞活性率為(88.35±2.45)%(n=30).光鏡下肝榦細胞呈卵圓形,直徑約為成熟肝細胞的1/3,電鏡下肝榦細胞直徑約10μm,細胞大部分被卵圓形細胞覈所佔據,細胞質少,覈漿比例大,內質網、線粒體、高爾基體等細胞器不髮達.ABC法免疫細胞化學染色顯示:胎兒肝榦細胞CK19、CD34及AFP呈暘性信號.對肝榦細胞進行培養,12 h後肝榦細胞逐漸粘附、貼壁、鋪展,呈現為圓形、橢圓形,呈上皮細胞樣平鋪生長.肝榦細胞產量為(8.76±0.46)×105箇/g(n=15).結論:兩步膠原酶灌註結閤不連續Percoll液密度梯度離心法可較好地分離純化胎兒肝榦細胞,所得細胞可體外培養,可做為進一步實驗的材料.
목적:분리、감정인태간중간간세포병단기배양,위체외확증급유도분화실험제공세포래원.방법:채용원위량보효원매관주결합Percoll액밀도제도리심적방법분리、순화태간중간간세포,용광경、전경관찰소득세포형태,통과면역세포화학염색검측세포AFP、CK19、CD34.측량간장중량급획득적간천세포수량,계산간간세포산량,대간간세포진행단기배양.결과:량보효원매관주가유효소화태인간장결체조직,분리적간장세포경불련속Percoll밀도제도리심,가득도간간세포,세포활성솔위(88.35±2.45)%(n=30).광경하간간세포정란원형,직경약위성숙간세포적1/3,전경하간간세포직경약10μm,세포대부분피란원형세포핵소점거,세포질소,핵장비례대,내질망、선립체、고이기체등세포기불발체.ABC법면역세포화학염색현시:태인간간세포CK19、CD34급AFP정양성신호.대간간세포진행배양,12 h후간간세포축점점부、첩벽、포전,정현위원형、타원형,정상피세포양평포생장.간간세포산량위(8.76±0.46)×105개/g(n=15).결론:량보효원매관주결합불련속Percoll액밀도제도리심법가교호지분리순화태인간간세포,소득세포가체외배양,가주위진일보실험적재료.
