中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2009年
6期
441-444
,共4页
刘闯%朱亭玉%李津%王钊%马锐%王曦%尹长城
劉闖%硃亭玉%李津%王釗%馬銳%王晞%尹長城
류틈%주정옥%리진%왕쇠%마예%왕희%윤장성
毕赤酵母%肝炎表面抗原%乙型%负染色%显微镜检查%电子%透射
畢赤酵母%肝炎錶麵抗原%乙型%負染色%顯微鏡檢查%電子%透射
필적효모%간염표면항원%을형%부염색%현미경검사%전자%투사
Pichia%Hepatitis B surface antigens%Negative staining%Microscopy%electron%transmission
目的 解析汉逊酵母表达重组乙肝表面抗原(HBsAg)的空间结构,给出其颗粒大小、结构对称性方面的信息.方法 整合adr 亚型 HBsAg的基因到汉逊酵母染色体上,建立重组汉逊酵母菌.经过发酵扩菌、诱导表达、精制纯化等步骤得到纯化的HBsAg.滴加5μl浓度为80 μg/mlHBsAg溶液到亲水处理的纯碳膜铜网上,用2%醋酸铀染色,放置24 h后,通过透射电镜得到汉逊酵母表达HBsAg颗粒的二维电镜图像.运用EMAN软件包完成图像选择、颗粒框取、颗粒全同性处理、初始模型构建和结构精修等HBsAg重构步骤,获得HBsAg颗粒的三维结构.结果 汉逊酵母表达HBsAg颗粒大小服从高斯分布(P=0.45),均值为(28.4.±2.6)nm;汉逊酵母表达HBsAg是-中空的"鱼笼"状结构,蛋白亚基分布在球状结构的表面;蛋白的表面分布大小为1～2 nm的孔状结构和围绕孔状结构的突起;不具备八面体对称性.结论 汉逊酵母表达的 HBsAg与血源性的 HBsAg 在大小和结构对称性方面都有显著差异.
目的 解析漢遜酵母錶達重組乙肝錶麵抗原(HBsAg)的空間結構,給齣其顆粒大小、結構對稱性方麵的信息.方法 整閤adr 亞型 HBsAg的基因到漢遜酵母染色體上,建立重組漢遜酵母菌.經過髮酵擴菌、誘導錶達、精製純化等步驟得到純化的HBsAg.滴加5μl濃度為80 μg/mlHBsAg溶液到親水處理的純碳膜銅網上,用2%醋痠鈾染色,放置24 h後,通過透射電鏡得到漢遜酵母錶達HBsAg顆粒的二維電鏡圖像.運用EMAN軟件包完成圖像選擇、顆粒框取、顆粒全同性處理、初始模型構建和結構精脩等HBsAg重構步驟,穫得HBsAg顆粒的三維結構.結果 漢遜酵母錶達HBsAg顆粒大小服從高斯分佈(P=0.45),均值為(28.4.±2.6)nm;漢遜酵母錶達HBsAg是-中空的"魚籠"狀結構,蛋白亞基分佈在毬狀結構的錶麵;蛋白的錶麵分佈大小為1～2 nm的孔狀結構和圍繞孔狀結構的突起;不具備八麵體對稱性.結論 漢遜酵母錶達的 HBsAg與血源性的 HBsAg 在大小和結構對稱性方麵都有顯著差異.
목적 해석한손효모표체중조을간표면항원(HBsAg)적공간결구,급출기과립대소、결구대칭성방면적신식.방법 정합adr 아형 HBsAg적기인도한손효모염색체상,건립중조한손효모균.경과발효확균、유도표체、정제순화등보취득도순화적HBsAg.적가5μl농도위80 μg/mlHBsAg용액도친수처리적순탄막동망상,용2%작산유염색,방치24 h후,통과투사전경득도한손효모표체HBsAg과립적이유전경도상.운용EMAN연건포완성도상선택、과립광취、과립전동성처리、초시모형구건화결구정수등HBsAg중구보취,획득HBsAg과립적삼유결구.결과 한손효모표체HBsAg과립대소복종고사분포(P=0.45),균치위(28.4.±2.6)nm;한손효모표체HBsAg시-중공적"어롱"상결구,단백아기분포재구상결구적표면;단백적표면분포대소위1～2 nm적공상결구화위요공상결구적돌기;불구비팔면체대칭성.결론 한손효모표체적 HBsAg여혈원성적 HBsAg 재대소화결구대칭성방면도유현저차이.
