中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2009年
6期
424-429
,共6页
张果%昌晓红%成夜霞%叶雪%程洪艳%魏丽惠%崔恒
張果%昌曉紅%成夜霞%葉雪%程洪豔%魏麗惠%崔恆
장과%창효홍%성야하%협설%정홍염%위려혜%최항
卵巢肿瘤%重组融合蛋白质类%HSP70热休克蛋白质类%抗体%包涵体
卵巢腫瘤%重組融閤蛋白質類%HSP70熱休剋蛋白質類%抗體%包涵體
란소종류%중조융합단백질류%HSP70열휴극단백질류%항체%포함체
Ovarian neoplasms%Recombinant fusion proteins%HSP70 heat-shock proteins%Antibodies%Inclusion bodies
目的 探讨大肠杆菌表达的卵巢癌抗独特型单链抗体,小鼠热休克蛋白70(6B11ScFv/mHSP70)融合蛋白包涵体变性、复性条件,以确定其最佳体外复性条件.方法 大肠杆菌表达大量融合蛋白6B11ScFv/mHSP70:①比较不同的裂解液(8 mol/L 尿素和6 mol/L 盐酸胍)对包涵体的裂解效率及其对复性蛋白活性的影响;②探索序贯稀释方法,以及氧化还原环境和复性液中不同浓度 L-精氨酸对蛋白稀释复件的影响;③比较稀释复性和柱上复性对融合蛋白复件效率及活性的影响.采用Bradford法测定包涵体裂解液与复性后蛋白浓度.所有复性蛋白活性的检测均采用ELISA方法.结果 以包涵体形式表达6B11ScFv/mHSP70蛋白:①经6 mol/L 盐酸胍裂解包涵体的效率远高于8 mol/L 尿素,但前者复性所得蛋白活性低,6 mol/L 盐酸胍彻底裂解的包涵体经8 mol/L 尿素透析后再复性,复性效率显著提高;②序贯稀释方法可提高蛋白复性效率;加入0.5 mol/L L-精氨酸可降低稀释复性过程中蛋白聚集物的产生,提高复性效率;加入还原型谷胱甘肽(GSH)与氧化型谷胱甘肽(GSSH)浓度比为1:5时,可提高复性后蛋白活性;③柱上复性可一步完成蛋白的复性和纯化,所得蛋白纯度较高,但复性效率和复性后蛋白活性较稀释复性低.结论 本研究建立了6B11ScFv/mHSP70融合蛋白的最佳复性条件:包涵体经6 mol/L 盐酸胍彻底裂解后,再经8 mol/L 尿素透析,然后进行序贯稀释复性,且复性液中加入0.5 mol/L L-精氨酸和GSH:GSSH=1:5以提高复性效率和蛋白活性,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础.
目的 探討大腸桿菌錶達的卵巢癌抗獨特型單鏈抗體,小鼠熱休剋蛋白70(6B11ScFv/mHSP70)融閤蛋白包涵體變性、複性條件,以確定其最佳體外複性條件.方法 大腸桿菌錶達大量融閤蛋白6B11ScFv/mHSP70:①比較不同的裂解液(8 mol/L 尿素和6 mol/L 鹽痠胍)對包涵體的裂解效率及其對複性蛋白活性的影響;②探索序貫稀釋方法,以及氧化還原環境和複性液中不同濃度 L-精氨痠對蛋白稀釋複件的影響;③比較稀釋複性和柱上複性對融閤蛋白複件效率及活性的影響.採用Bradford法測定包涵體裂解液與複性後蛋白濃度.所有複性蛋白活性的檢測均採用ELISA方法.結果 以包涵體形式錶達6B11ScFv/mHSP70蛋白:①經6 mol/L 鹽痠胍裂解包涵體的效率遠高于8 mol/L 尿素,但前者複性所得蛋白活性低,6 mol/L 鹽痠胍徹底裂解的包涵體經8 mol/L 尿素透析後再複性,複性效率顯著提高;②序貫稀釋方法可提高蛋白複性效率;加入0.5 mol/L L-精氨痠可降低稀釋複性過程中蛋白聚集物的產生,提高複性效率;加入還原型穀胱甘肽(GSH)與氧化型穀胱甘肽(GSSH)濃度比為1:5時,可提高複性後蛋白活性;③柱上複性可一步完成蛋白的複性和純化,所得蛋白純度較高,但複性效率和複性後蛋白活性較稀釋複性低.結論 本研究建立瞭6B11ScFv/mHSP70融閤蛋白的最佳複性條件:包涵體經6 mol/L 鹽痠胍徹底裂解後,再經8 mol/L 尿素透析,然後進行序貫稀釋複性,且複性液中加入0.5 mol/L L-精氨痠和GSH:GSSH=1:5以提高複性效率和蛋白活性,為進一步研究該蛋白的功能奠定瞭基礎.
목적 탐토대장간균표체적란소암항독특형단련항체,소서열휴극단백70(6B11ScFv/mHSP70)융합단백포함체변성、복성조건,이학정기최가체외복성조건.방법 대장간균표체대량융합단백6B11ScFv/mHSP70:①비교불동적렬해액(8 mol/L 뇨소화6 mol/L 염산고)대포함체적렬해효솔급기대복성단백활성적영향;②탐색서관희석방법,이급양화환원배경화복성액중불동농도 L-정안산대단백희석복건적영향;③비교희석복성화주상복성대융합단백복건효솔급활성적영향.채용Bradford법측정포함체렬해액여복성후단백농도.소유복성단백활성적검측균채용ELISA방법.결과 이포함체형식표체6B11ScFv/mHSP70단백:①경6 mol/L 염산고렬해포함체적효솔원고우8 mol/L 뇨소,단전자복성소득단백활성저,6 mol/L 염산고철저렬해적포함체경8 mol/L 뇨소투석후재복성,복성효솔현저제고;②서관희석방법가제고단백복성효솔;가입0.5 mol/L L-정안산가강저희석복성과정중단백취집물적산생,제고복성효솔;가입환원형곡광감태(GSH)여양화형곡광감태(GSSH)농도비위1:5시,가제고복성후단백활성;③주상복성가일보완성단백적복성화순화,소득단백순도교고,단복성효솔화복성후단백활성교희석복성저.결론 본연구건립료6B11ScFv/mHSP70융합단백적최가복성조건:포함체경6 mol/L 염산고철저렬해후,재경8 mol/L 뇨소투석,연후진행서관희석복성,차복성액중가입0.5 mol/L L-정안산화GSH:GSSH=1:5이제고복성효솔화단백활성,위진일보연구해단백적공능전정료기출.
