中国畜牧兽医
中國畜牧獸醫
중국축목수의
CHINA ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2009年
12期
67-70
,共4页
安星兰%王子竹%张志崇%曲丽威%王春生%朴善花%安铁洙
安星蘭%王子竹%張誌崇%麯麗威%王春生%樸善花%安鐵洙
안성란%왕자죽%장지숭%곡려위%왕춘생%박선화%안철수
质粒DNA%绵羊成纤维细胞%转染%脂质体法
質粒DNA%綿羊成纖維細胞%轉染%脂質體法
질립DNA%면양성섬유세포%전염%지질체법
为了优化建立转染绵羊成纤维细胞系的外源基因转染体系,本研究利用带有绿色荧光蛋白(GFP)的外源基因,采用阳离子脂质体法,探讨了DNA用量、脂质体用量和转染时间等因素对转染绵羊成纤维细胞的影响.结果表明,在500μL转染培养基中成纤维细胞达到85%汇合时,添加由50μL DMEM中含有O.2μg DNA和50μL DMEM中含有2.0μL LipofectamineTM 2000的两种溶液混合构成的转染液并转染12 h,可获得最高的转染效率.当转染12 h后,用基础培养液培养至第24小时,细胞核周区出现强绿色荧光,而当转染后48～64 h观察时,细胞核周区的荧光强度明显弱,而远离核周区的胞质中的荧光强度增加.
為瞭優化建立轉染綿羊成纖維細胞繫的外源基因轉染體繫,本研究利用帶有綠色熒光蛋白(GFP)的外源基因,採用暘離子脂質體法,探討瞭DNA用量、脂質體用量和轉染時間等因素對轉染綿羊成纖維細胞的影響.結果錶明,在500μL轉染培養基中成纖維細胞達到85%彙閤時,添加由50μL DMEM中含有O.2μg DNA和50μL DMEM中含有2.0μL LipofectamineTM 2000的兩種溶液混閤構成的轉染液併轉染12 h,可穫得最高的轉染效率.噹轉染12 h後,用基礎培養液培養至第24小時,細胞覈週區齣現彊綠色熒光,而噹轉染後48～64 h觀察時,細胞覈週區的熒光彊度明顯弱,而遠離覈週區的胞質中的熒光彊度增加.
위료우화건립전염면양성섬유세포계적외원기인전염체계,본연구이용대유록색형광단백(GFP)적외원기인,채용양리자지질체법,탐토료DNA용량、지질체용량화전염시간등인소대전염면양성섬유세포적영향.결과표명,재500μL전염배양기중성섬유세포체도85%회합시,첨가유50μL DMEM중함유O.2μg DNA화50μL DMEM중함유2.0μL LipofectamineTM 2000적량충용액혼합구성적전염액병전염12 h,가획득최고적전염효솔.당전염12 h후,용기출배양액배양지제24소시,세포핵주구출현강록색형광,이당전염후48～64 h관찰시,세포핵주구적형광강도명현약,이원리핵주구적포질중적형광강도증가.
