中国动物保健
中國動物保健
중국동물보건
CHINA ANIMAL HEALTH
2009年
12期
46-51
,共6页
张坤%马丽娟%李刚%黄伟%李伟%贾凤琴
張坤%馬麗娟%李剛%黃偉%李偉%賈鳳琴
장곤%마려연%리강%황위%리위%가봉금
犬细小病毒%原核表达%纯化
犬細小病毒%原覈錶達%純化
견세소병독%원핵표체%순화
参照GenBank中犬细小病毒VP2基因序列设计了一对添加EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点的引物,对CPV VP2基因进行PCR扩增,克隆至pGM-T载体,获得重组质粒pGM-T-VP2,将重组质粒亚克隆到表达载体pET-32a上,获得表达重组子pET-32a-VP2,经EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切鉴定后,序列分析确定该重组子YM株VP2基因ORF正确,转化至E.coli Rosetta(DE3)中,获得了基因工程菌株E.coilRosetta(CVP2),并对重组菌进行了诱导表达,鉴定及纯化.结果表明纯化样品中含有87 kDa目的蛋白,Western blot检测发现该蛋白与犬细小病毒多克隆抗体发生反应,出现特异条带.E.coil Rosetta(CVP2)以包涵体形式表达出了CPV-YM株VP2,从而为进一步制备检测抗体效价的胶体金检测试剂盒的开发研究打下了良好的基础.
參照GenBank中犬細小病毒VP2基因序列設計瞭一對添加EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位點的引物,對CPV VP2基因進行PCR擴增,剋隆至pGM-T載體,穫得重組質粒pGM-T-VP2,將重組質粒亞剋隆到錶達載體pET-32a上,穫得錶達重組子pET-32a-VP2,經EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ雙酶切鑒定後,序列分析確定該重組子YM株VP2基因ORF正確,轉化至E.coli Rosetta(DE3)中,穫得瞭基因工程菌株E.coilRosetta(CVP2),併對重組菌進行瞭誘導錶達,鑒定及純化.結果錶明純化樣品中含有87 kDa目的蛋白,Western blot檢測髮現該蛋白與犬細小病毒多剋隆抗體髮生反應,齣現特異條帶.E.coil Rosetta(CVP2)以包涵體形式錶達齣瞭CPV-YM株VP2,從而為進一步製備檢測抗體效價的膠體金檢測試劑盒的開髮研究打下瞭良好的基礎.
삼조GenBank중견세소병독VP2기인서렬설계료일대첨가EcoR Ⅰ화Xho Ⅰ매절위점적인물,대CPV VP2기인진행PCR확증,극륭지pGM-T재체,획득중조질립pGM-T-VP2,장중조질립아극륭도표체재체pET-32a상,획득표체중조자pET-32a-VP2,경EcoR Ⅰ화Xho Ⅰ쌍매절감정후,서렬분석학정해중조자YM주VP2기인ORF정학,전화지E.coli Rosetta(DE3)중,획득료기인공정균주E.coilRosetta(CVP2),병대중조균진행료유도표체,감정급순화.결과표명순화양품중함유87 kDa목적단백,Western blot검측발현해단백여견세소병독다극륭항체발생반응,출현특이조대.E.coil Rosetta(CVP2)이포함체형식표체출료CPV-YM주VP2,종이위진일보제비검측항체효개적효체금검측시제합적개발연구타하료량호적기출.
