CAJ | 학술논문

[目的] 探讨流体切应力(FSS)促成骨细胞增殖、分化作用与细胞周期从G1期向S期转化机制的关系,为确立最佳生理应力刺激骨再生提供依据.[方法] 从KM乳鼠颅盖骨提取原代成骨细胞,在体外流体小室内分别受FSS(12 dyn/cm2)作用0、0.25、0.5、1、2、4 h,通过MTT法分析细胞增殖能力,并利用碱性磷酸酶(ALP)的表达评价其分化能力;通过流式细胞仪、免疫荧光染色和RT-PCR测定细胞周期G1/S百分比、细胞周期依赖激酶2和4(CDK2、CDK4)的活性改变及E2F1、p27mRNA的表达实现FSS促成骨细胞由G1期转向S期的测定.[结果] FSS促增殖作用在短期(0.25 h、0.5 h)明显,并且细胞生长曲线前移;但在1、2、4 h却有明显抑制增殖作用.FSS同样增加了ALP的活性,尤其在应力作用0.25、0.5 h时显著(比对照达128%和158%);而应力作用1、2、4 h后减低了ALP的表达.在FSS作用1 h内细胞周期S期百分比增高,作用0.5 h后与对照组比较明显增高(P<0.05);但随着时间的增加细胞周期S期百分比开始下降,当作用时间持续4 h后S期百分比下降明显(P<0.05).流体切应力增加了活化pRb的CDK2、CDK4的活性,而且与CDK2相关的E2F1表达量也明显增加;而细胞周期依赖激酶抑制剂p27在流体切应力作用下有所下降.其中流体切应力在0.25 h、0.5 h明显增加了E2Fl mRNA的表达水平(P<0.05),此效应在作用1 h后减退.[结论] 适宜的流体切应力通过上调CDK2、CDK4及E2F1,下调p27,使细胞从G1期转化到S期,在流体切应力促成骨细胞增殖、分化机制中起重要作用;并且这种作用有明显的FSS作用时间限制性.
[목적] 탐토류체절응력(FSS)촉성골세포증식、분화작용여세포주기종G1기향S기전화궤제적관계,위학립최가생리응력자격골재생제공의거.[방법] 종KM유서로개골제취원대성골세포,재체외류체소실내분별수FSS(12 dyn/cm2)작용0、0.25、0.5、1、2、4 h,통과MTT법분석세포증식능력,병이용감성린산매(ALP)적표체평개기분화능력;통과류식세포의、면역형광염색화RT-PCR측정세포주기G1/S백분비、세포주기의뢰격매2화4(CDK2、CDK4)적활성개변급E2F1、p27mRNA적표체실현FSS촉성골세포유G1기전향S기적측정.[결과] FSS촉증식작용재단기(0.25 h、0.5 h)명현,병차세포생장곡선전이;단재1、2、4 h각유명현억제증식작용.FSS동양증가료ALP적활성,우기재응력작용0.25、0.5 h시현저(비대조체128%화158%);이응력작용1、2、4 h후감저료ALP적표체.재FSS작용1 h내세포주기S기백분비증고,작용0.5 h후여대조조비교명현증고(P<0.05);단수착시간적증가세포주기S기백분비개시하강,당작용시간지속4 h후S기백분비하강명현(P<0.05).류체절응력증가료활화pRb적CDK2、CDK4적활성,이차여CDK2상관적E2F1표체량야명현증가;이세포주기의뢰격매억제제p27재류체절응력작용하유소하강.기중류체절응력재0.25 h、0.5 h명현증가료E2Fl mRNA적표체수평(P<0.05),차효응재작용1 h후감퇴.[결론] 괄의적류체절응력통과상조CDK2、CDK4급E2F1,하조p27,사세포종G1기전화도S기,재류체절응력촉성골세포증식、분화궤제중기중요작용;병차저충작용유명현적FSS작용시간한제성.