畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2009年
10期
1454-1459
,共6页
郑喜邦%杨照海%刘平%赵华%卢晟盛%卢克焕%毕方方
鄭喜邦%楊照海%劉平%趙華%盧晟盛%盧剋煥%畢方方
정희방%양조해%류평%조화%로성성%로극환%필방방
Sox2基因%原核表达%蛋白纯化%山羊
Sox2基因%原覈錶達%蛋白純化%山羊
Sox2기인%원핵표체%단백순화%산양
本研究旨在克隆山羊Sox2基因,构建pGEX-Sox2原核表达重组质粒,从大肠杆菌中获得纯化的GST-Sox2融合蛋白.应用RT-PCR方法从6周龄胎山羊生殖嵴扩增Sox2基因编码全序列,将其克隆到pMD18-T载体,然后再亚克隆到pGEX-KG表达载体.重组质粒pGEX-Sox2转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,用SDS-PAGE电泳及Western blotting检测GST-Sox2融合蛋白表达,用谷胱甘肽Sepharose 4B介质分离纯化该融合蛋白.结果表明,山羊Sox2基因编码序列全长为960 bp;在优化的表达条件(1 mmo|·L-1 IPTG,22℃诱导16h)下,重组质粒(pGEX-Sox2)在大肠杆菌得到了高效表达;谷胱甘肽Sepharose 4B颗粒纯化蛋白得到预期大小的融合蛋白(约60 ku).结论,本研究克隆了山羊Sox2基因,获得了纯化的GST-Sox2融合蛋白,为制备其多克隆抗体奠定了基础,为进一步研究山羊iPS细胞(Induced pluripotent stem cells)创造了条件.
本研究旨在剋隆山羊Sox2基因,構建pGEX-Sox2原覈錶達重組質粒,從大腸桿菌中穫得純化的GST-Sox2融閤蛋白.應用RT-PCR方法從6週齡胎山羊生殖嵴擴增Sox2基因編碼全序列,將其剋隆到pMD18-T載體,然後再亞剋隆到pGEX-KG錶達載體.重組質粒pGEX-Sox2轉化大腸桿菌BL21(DE3),經IPTG誘導,用SDS-PAGE電泳及Western blotting檢測GST-Sox2融閤蛋白錶達,用穀胱甘肽Sepharose 4B介質分離純化該融閤蛋白.結果錶明,山羊Sox2基因編碼序列全長為960 bp;在優化的錶達條件(1 mmo|·L-1 IPTG,22℃誘導16h)下,重組質粒(pGEX-Sox2)在大腸桿菌得到瞭高效錶達;穀胱甘肽Sepharose 4B顆粒純化蛋白得到預期大小的融閤蛋白(約60 ku).結論,本研究剋隆瞭山羊Sox2基因,穫得瞭純化的GST-Sox2融閤蛋白,為製備其多剋隆抗體奠定瞭基礎,為進一步研究山羊iPS細胞(Induced pluripotent stem cells)創造瞭條件.
본연구지재극륭산양Sox2기인,구건pGEX-Sox2원핵표체중조질립,종대장간균중획득순화적GST-Sox2융합단백.응용RT-PCR방법종6주령태산양생식척확증Sox2기인편마전서렬,장기극륭도pMD18-T재체,연후재아극륭도pGEX-KG표체재체.중조질립pGEX-Sox2전화대장간균BL21(DE3),경IPTG유도,용SDS-PAGE전영급Western blotting검측GST-Sox2융합단백표체,용곡광감태Sepharose 4B개질분리순화해융합단백.결과표명,산양Sox2기인편마서렬전장위960 bp;재우화적표체조건(1 mmo|·L-1 IPTG,22℃유도16h)하,중조질립(pGEX-Sox2)재대장간균득도료고효표체;곡광감태Sepharose 4B과립순화단백득도예기대소적융합단백(약60 ku).결론,본연구극륭료산양Sox2기인,획득료순화적GST-Sox2융합단백,위제비기다극륭항체전정료기출,위진일보연구산양iPS세포(Induced pluripotent stem cells)창조료조건.
