中国肿瘤临床
中國腫瘤臨床
중국종류림상
CHINESE JOURNAL OF CLINICAL ONCOLOGY
2009年
19期
1117-1119
,共3页
胡海龙%韩瑞发%孙岩%刘利维%任海林%梁恩利%王春阳%吴长利
鬍海龍%韓瑞髮%孫巖%劉利維%任海林%樑恩利%王春暘%吳長利
호해룡%한서발%손암%류리유%임해림%량은리%왕춘양%오장리
AAV系统%RNAi%E2F3
AAV繫統%RNAi%E2F3
AAV계통%RNAi%E2F3
目的:构建针对E2F3基因的腺相关病毒干扰穿梭质粒载体,为进一步包装能够表达干扰序列的病毒奠定基础.方法:通过已经合成的pRNAT-U6.1-siE2F3/Neo干扰质粒载体,进行限制性内切酶Mlu酶切,将干扰片段克隆入线性质粒pAAV-MCS中,构建具有表达沉默E2F3基因的RNA干扰穿梭质粒.通过BglⅡ及Mlu单酶切,BamH1和HandⅢ双酶切、PCR鉴定及基因片段序列分析验证构建是否成功.结果:pAAV-siE2F3线性化后,片段大小约6 300bp;以Mlu为两边酶切位点设计的引物对重组质粒进行PCR,可获得的产物大小1700bp;应用ITR专用引物进行重组质粒的PCR后证实本研究所构建的重组质粒ITR片段存在,大小约3500bp,上述指标均与预期设计结果相符.基因测序结果表明插入序列无基因突变,序列完整.结论:穿梭质粒载体的成功构建,为进一步包装能够表达针对E2F3基因干扰序列的腺相关病毒,进一步研究E2F3基因在肿瘤中的功能奠定基础.
目的:構建針對E2F3基因的腺相關病毒榦擾穿梭質粒載體,為進一步包裝能夠錶達榦擾序列的病毒奠定基礎.方法:通過已經閤成的pRNAT-U6.1-siE2F3/Neo榦擾質粒載體,進行限製性內切酶Mlu酶切,將榦擾片段剋隆入線性質粒pAAV-MCS中,構建具有錶達沉默E2F3基因的RNA榦擾穿梭質粒.通過BglⅡ及Mlu單酶切,BamH1和HandⅢ雙酶切、PCR鑒定及基因片段序列分析驗證構建是否成功.結果:pAAV-siE2F3線性化後,片段大小約6 300bp;以Mlu為兩邊酶切位點設計的引物對重組質粒進行PCR,可穫得的產物大小1700bp;應用ITR專用引物進行重組質粒的PCR後證實本研究所構建的重組質粒ITR片段存在,大小約3500bp,上述指標均與預期設計結果相符.基因測序結果錶明插入序列無基因突變,序列完整.結論:穿梭質粒載體的成功構建,為進一步包裝能夠錶達針對E2F3基因榦擾序列的腺相關病毒,進一步研究E2F3基因在腫瘤中的功能奠定基礎.
목적:구건침대E2F3기인적선상관병독간우천사질립재체,위진일보포장능구표체간우서렬적병독전정기출.방법:통과이경합성적pRNAT-U6.1-siE2F3/Neo간우질립재체,진행한제성내절매Mlu매절,장간우편단극륭입선성질립pAAV-MCS중,구건구유표체침묵E2F3기인적RNA간우천사질립.통과BglⅡ급Mlu단매절,BamH1화HandⅢ쌍매절、PCR감정급기인편단서렬분석험증구건시부성공.결과:pAAV-siE2F3선성화후,편단대소약6 300bp;이Mlu위량변매절위점설계적인물대중조질립진행PCR,가획득적산물대소1700bp;응용ITR전용인물진행중조질립적PCR후증실본연구소구건적중조질립ITR편단존재,대소약3500bp,상술지표균여예기설계결과상부.기인측서결과표명삽입서렬무기인돌변,서렬완정.결론:천사질립재체적성공구건,위진일보포장능구표체침대E2F3기인간우서렬적선상관병독,진일보연구E2F3기인재종류중적공능전정기출.
