工业微生物
工業微生物
공업미생물
INDUSTRIAL MICROBIOLOGY
2009年
5期
30-38
,共9页
秦国梅%张建珍%黄艳燕%韦宇拓%杜丽琴%庞宗文%黄日波
秦國梅%張建珍%黃豔燕%韋宇拓%杜麗琴%龐宗文%黃日波
진국매%장건진%황염연%위우탁%두려금%방종문%황일파
内切-β-1%4-葡聚糖酶%台湾家白蚁%酿酒酵母
內切-β-1%4-葡聚糖酶%檯灣傢白蟻%釀酒酵母
내절-β-1%4-포취당매%태만가백의%양주효모
提取了台湾家白蚁总RNA并反转录获得cDNA,PCR扩增出白蚁内切葡聚糖酶的基因,并将目的基因分别克隆到大肠杆菌和酿酒酵母载体中,构建了产内切-β-1,4-葡聚糖酶的基因工程菌.由于大肠杆菌会有少量的泄漏表达,而所用的酿酒酵母表达载体是本实验室构建带有INU信号肽的表达载体,故都可采用刚果红平板染色法筛选具有羧甲基纤维素酶(CMCase)活性的重组转化子.利用金属镍亲和层析对大肠杆菌表达的内切-β-1,4-葡聚糖酶进行纯化,CMC酶活检测显示纯化酶的最适温度和最适pH值分别为42 ℃、6.5;内切-β-1,4-葡聚糖酶的Vmax为0.071 mg/mL·min,Km值为80.2712 mg/mL.
提取瞭檯灣傢白蟻總RNA併反轉錄穫得cDNA,PCR擴增齣白蟻內切葡聚糖酶的基因,併將目的基因分彆剋隆到大腸桿菌和釀酒酵母載體中,構建瞭產內切-β-1,4-葡聚糖酶的基因工程菌.由于大腸桿菌會有少量的洩漏錶達,而所用的釀酒酵母錶達載體是本實驗室構建帶有INU信號肽的錶達載體,故都可採用剛果紅平闆染色法篩選具有羧甲基纖維素酶(CMCase)活性的重組轉化子.利用金屬鎳親和層析對大腸桿菌錶達的內切-β-1,4-葡聚糖酶進行純化,CMC酶活檢測顯示純化酶的最適溫度和最適pH值分彆為42 ℃、6.5;內切-β-1,4-葡聚糖酶的Vmax為0.071 mg/mL·min,Km值為80.2712 mg/mL.
제취료태만가백의총RNA병반전록획득cDNA,PCR확증출백의내절포취당매적기인,병장목적기인분별극륭도대장간균화양주효모재체중,구건료산내절-β-1,4-포취당매적기인공정균.유우대장간균회유소량적설루표체,이소용적양주효모표체재체시본실험실구건대유INU신호태적표체재체,고도가채용강과홍평판염색법사선구유최갑기섬유소매(CMCase)활성적중조전화자.이용금속얼친화층석대대장간균표체적내절-β-1,4-포취당매진행순화,CMC매활검측현시순화매적최괄온도화최괄pH치분별위42 ℃、6.5;내절-β-1,4-포취당매적Vmax위0.071 mg/mL·min,Km치위80.2712 mg/mL.
