工业微生物
工業微生物
공업미생물
INDUSTRIAL MICROBIOLOGY
2009年
5期
18-24
,共7页
黄艳燕%左文朴%秦国梅%韦宇拓%杜丽琴%庞宗文%黄日波
黃豔燕%左文樸%秦國梅%韋宇拓%杜麗琴%龐宗文%黃日波
황염연%좌문박%진국매%위우탁%두려금%방종문%황일파
绿色木霉%葡聚糖内切酶III%大肠杆菌%定点饱和突变
綠色木黴%葡聚糖內切酶III%大腸桿菌%定點飽和突變
록색목매%포취당내절매III%대장간균%정점포화돌변
将绿色木霉葡聚糖内切酶EGIII基因亚克隆到表达载体pET-22b(+),构建重组质粒pET-egl3,转化到大肠杆菌BL21(DE3).利用金属亲和层析对重组EGIII进行纯化,纯化后酶比活力达到6 U/mg蛋白,最适反应温度为60 ℃,最适pH为4.0.同时对EGIII催化区的氨基酸残基R130和E218进行定点饱和突变,各筛选到一株酶活有提高的突变子R130P和E218F,其比活力为野生型EGIII的2.8倍和3.45倍.突变酶E218F的Km提高了一倍,催化效率Kcat提高了5.4倍;而R130P的Km和Kcat没有明显变化.两个突变酶的最适酶解温度和pH分别都提高至65 ℃和4.4.
將綠色木黴葡聚糖內切酶EGIII基因亞剋隆到錶達載體pET-22b(+),構建重組質粒pET-egl3,轉化到大腸桿菌BL21(DE3).利用金屬親和層析對重組EGIII進行純化,純化後酶比活力達到6 U/mg蛋白,最適反應溫度為60 ℃,最適pH為4.0.同時對EGIII催化區的氨基痠殘基R130和E218進行定點飽和突變,各篩選到一株酶活有提高的突變子R130P和E218F,其比活力為野生型EGIII的2.8倍和3.45倍.突變酶E218F的Km提高瞭一倍,催化效率Kcat提高瞭5.4倍;而R130P的Km和Kcat沒有明顯變化.兩箇突變酶的最適酶解溫度和pH分彆都提高至65 ℃和4.4.
장록색목매포취당내절매EGIII기인아극륭도표체재체pET-22b(+),구건중조질립pET-egl3,전화도대장간균BL21(DE3).이용금속친화층석대중조EGIII진행순화,순화후매비활력체도6 U/mg단백,최괄반응온도위60 ℃,최괄pH위4.0.동시대EGIII최화구적안기산잔기R130화E218진행정점포화돌변,각사선도일주매활유제고적돌변자R130P화E218F,기비활력위야생형EGIII적2.8배화3.45배.돌변매E218F적Km제고료일배,최화효솔Kcat제고료5.4배;이R130P적Km화Kcat몰유명현변화.량개돌변매적최괄매해온도화pH분별도제고지65 ℃화4.4.
