中国实验诊断学
中國實驗診斷學
중국실험진단학
CHINESE JOURNAL OF LABORATORY DIAGNOSIS
2012年
12期
2159-2161
,共3页
黄前川%杨长亮%曹军皓%丁进亚
黃前川%楊長亮%曹軍皓%丁進亞
황전천%양장량%조군호%정진아
hAP-2α%诱饵载体%酵母双杂交%自激活作用
hAP-2α%誘餌載體%酵母雙雜交%自激活作用
hAP-2α%유이재체%효모쌍잡교%자격활작용
目的 构建hAP-2α转录因子酵母双杂交诱饵载体,检测hAP-2α转录因子在酵母双杂交中的表达及对报告基因有无激活作用,为进一步研究乳腺癌中hAP-2α转录因子相互作用蛋白的作用机制奠定基础.方法 通过RT-PCR方法从Hela细胞克隆hAP-2α基因,SalI和EcoRI双酶切后连接诱饵载体pGBKT7,获得诱饵质粒pGBKT7-hAP2α,经测序鉴定后与酵母双杂交空质粒pGBKT7转化到酵母菌株AH109,在营养缺陷培养基中观察pGBKT7-hAP2α的自激活作用,同时利用蛋白印迹法分析诱饵蛋白的表达.结果 成功扩增人乳腺癌hAP-2α基因,并准确克隆入pGBKT7中,诱饵载体pGBKT7-hAP2α成功转化到酵母菌株AH109中,经表型筛选检测无自激活作用,蛋白印迹法检测证实pGBKT7-hAP2α在酵母细胞中表达诱饵蛋白hAP2α.结论 成功构建酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7-hAP2α,诱饵质粒pGBKT7-hAP2α无自激活活性,可用于研究乳腺癌或其他疾病中与hAP-2α蛋白的相互作用分子.
目的 構建hAP-2α轉錄因子酵母雙雜交誘餌載體,檢測hAP-2α轉錄因子在酵母雙雜交中的錶達及對報告基因有無激活作用,為進一步研究乳腺癌中hAP-2α轉錄因子相互作用蛋白的作用機製奠定基礎.方法 通過RT-PCR方法從Hela細胞剋隆hAP-2α基因,SalI和EcoRI雙酶切後連接誘餌載體pGBKT7,穫得誘餌質粒pGBKT7-hAP2α,經測序鑒定後與酵母雙雜交空質粒pGBKT7轉化到酵母菌株AH109,在營養缺陷培養基中觀察pGBKT7-hAP2α的自激活作用,同時利用蛋白印跡法分析誘餌蛋白的錶達.結果 成功擴增人乳腺癌hAP-2α基因,併準確剋隆入pGBKT7中,誘餌載體pGBKT7-hAP2α成功轉化到酵母菌株AH109中,經錶型篩選檢測無自激活作用,蛋白印跡法檢測證實pGBKT7-hAP2α在酵母細胞中錶達誘餌蛋白hAP2α.結論 成功構建酵母雙雜交誘餌質粒pGBKT7-hAP2α,誘餌質粒pGBKT7-hAP2α無自激活活性,可用于研究乳腺癌或其他疾病中與hAP-2α蛋白的相互作用分子.
목적 구건hAP-2α전록인자효모쌍잡교유이재체,검측hAP-2α전록인자재효모쌍잡교중적표체급대보고기인유무격활작용,위진일보연구유선암중hAP-2α전록인자상호작용단백적작용궤제전정기출.방법 통과RT-PCR방법종Hela세포극륭hAP-2α기인,SalI화EcoRI쌍매절후련접유이재체pGBKT7,획득유이질립pGBKT7-hAP2α,경측서감정후여효모쌍잡교공질립pGBKT7전화도효모균주AH109,재영양결함배양기중관찰pGBKT7-hAP2α적자격활작용,동시이용단백인적법분석유이단백적표체.결과 성공확증인유선암hAP-2α기인,병준학극륭입pGBKT7중,유이재체pGBKT7-hAP2α성공전화도효모균주AH109중,경표형사선검측무자격활작용,단백인적법검측증실pGBKT7-hAP2α재효모세포중표체유이단백hAP2α.결론 성공구건효모쌍잡교유이질립pGBKT7-hAP2α,유이질립pGBKT7-hAP2α무자격활활성,가용우연구유선암혹기타질병중여hAP-2α단백적상호작용분자.
