科技创新导报
科技創新導報
과기창신도보
SCIENCE AND TECHNOLOGY CONSULTING HERALD
2012年
12期
226-228
,共3页
头孢菌素C酰化酶%原核系统
頭孢菌素C酰化酶%原覈繫統
두포균소C선화매%원핵계통
目的:构建头孢菌素C酰化酶(Cephalosporin C Acylase)基因的两种原核表达载体,确定高效原核表达体系。方法:人工合成头孢菌素C酰化酶S12基因,分别克隆到含有Lac启动子的载体pBC KS和T7-lac启动子的载体pET-28a上,命名为pBC-S12和pET-28-S12,重组质粒分别转化感受态大肠杆菌DH5α和BL21(DE3),表达纯化目的蛋白S12,测定酶活。结果:成功地构建了头孢菌素C酰化酶S12的原核表达菌株,组成型表达和诱导型表达体系的表达量低,目的蛋白具有酶活,诱导型表达产生的酶比组成型表达产生的酶具有更强活性,可作为大肠杆菌表达头孢菌素C酰化酶的高效表达体系。
目的:構建頭孢菌素C酰化酶(Cephalosporin C Acylase)基因的兩種原覈錶達載體,確定高效原覈錶達體繫。方法:人工閤成頭孢菌素C酰化酶S12基因,分彆剋隆到含有Lac啟動子的載體pBC KS和T7-lac啟動子的載體pET-28a上,命名為pBC-S12和pET-28-S12,重組質粒分彆轉化感受態大腸桿菌DH5α和BL21(DE3),錶達純化目的蛋白S12,測定酶活。結果:成功地構建瞭頭孢菌素C酰化酶S12的原覈錶達菌株,組成型錶達和誘導型錶達體繫的錶達量低,目的蛋白具有酶活,誘導型錶達產生的酶比組成型錶達產生的酶具有更彊活性,可作為大腸桿菌錶達頭孢菌素C酰化酶的高效錶達體繫。
목적:구건두포균소C선화매(Cephalosporin C Acylase)기인적량충원핵표체재체,학정고효원핵표체체계。방법:인공합성두포균소C선화매S12기인,분별극륭도함유Lac계동자적재체pBC KS화T7-lac계동자적재체pET-28a상,명명위pBC-S12화pET-28-S12,중조질립분별전화감수태대장간균DH5α화BL21(DE3),표체순화목적단백S12,측정매활。결과:성공지구건료두포균소C선화매S12적원핵표체균주,조성형표체화유도형표체체계적표체량저,목적단백구유매활,유도형표체산생적매비조성형표체산생적매구유경강활성,가작위대장간균표체두포균소C선화매적고효표체체계。