动物学研究
動物學研究
동물학연구
ZOOLOGICAL RESEARCH
2009年
5期
520-526
,共7页
肝癌组织及细胞系%总RNA抽提%反转录%q-RT-PCR%长片段基因克隆
肝癌組織及細胞繫%總RNA抽提%反轉錄%q-RT-PCR%長片段基因剋隆
간암조직급세포계%총RNA추제%반전록%q-RT-PCR%장편단기인극륭
该文建立了高效肝组织及细胞总RNA抽提、反转录以进行基因克隆和实时定量PCR(q-RT-PCR)的方法.比较了2种反转录酶(M-MLV和SuperScriptII)、2种cDNA合成引物(Oligo dT和random 6 primer)对总RNA反转录效率的影响,与4种DNA聚合酶(Taq聚合酶、Pfu聚合酶、LA taq聚合酶、Prime Star聚合酶)进行长片段基因克隆的能力及效率;同时,该研究比较了不同质量总RNA对有效进行q-RT-PCR与长片段分子克隆的影响.新建立的RNA提取方法使得RNA完整性和均一性提高.RNA的完整性及均一性对长片段cDNA的克隆至关重要.部分降解的组织RNA及细胞RNA仅适合于q-RT-PCR检测mRNA的表达水平,而不适合于cDNA的克隆.
該文建立瞭高效肝組織及細胞總RNA抽提、反轉錄以進行基因剋隆和實時定量PCR(q-RT-PCR)的方法.比較瞭2種反轉錄酶(M-MLV和SuperScriptII)、2種cDNA閤成引物(Oligo dT和random 6 primer)對總RNA反轉錄效率的影響,與4種DNA聚閤酶(Taq聚閤酶、Pfu聚閤酶、LA taq聚閤酶、Prime Star聚閤酶)進行長片段基因剋隆的能力及效率;同時,該研究比較瞭不同質量總RNA對有效進行q-RT-PCR與長片段分子剋隆的影響.新建立的RNA提取方法使得RNA完整性和均一性提高.RNA的完整性及均一性對長片段cDNA的剋隆至關重要.部分降解的組織RNA及細胞RNA僅適閤于q-RT-PCR檢測mRNA的錶達水平,而不適閤于cDNA的剋隆.
해문건립료고효간조직급세포총RNA추제、반전록이진행기인극륭화실시정량PCR(q-RT-PCR)적방법.비교료2충반전록매(M-MLV화SuperScriptII)、2충cDNA합성인물(Oligo dT화random 6 primer)대총RNA반전록효솔적영향,여4충DNA취합매(Taq취합매、Pfu취합매、LA taq취합매、Prime Star취합매)진행장편단기인극륭적능력급효솔;동시,해연구비교료불동질량총RNA대유효진행q-RT-PCR여장편단분자극륭적영향.신건립적RNA제취방법사득RNA완정성화균일성제고.RNA적완정성급균일성대장편단cDNA적극륭지관중요.부분강해적조직RNA급세포RNA부괄합우q-RT-PCR검측mRNA적표체수평,이불괄합우cDNA적극륭.
