中国比较医学杂志
中國比較醫學雜誌
중국비교의학잡지
CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE
2013年
9期
31-35,封2
,共6页
薛洪省%王海娟%刘健%张丽%林晨%詹启敏%赵志龙%钱海利
薛洪省%王海娟%劉健%張麗%林晨%詹啟敏%趙誌龍%錢海利
설홍성%왕해연%류건%장려%림신%첨계민%조지룡%전해리
MTA1%转基因%构建%鉴定
MTA1%轉基因%構建%鑒定
MTA1%전기인%구건%감정
MTA1%Transgenic%Establishment%Identification
目的 将人的MTA1外源基因整合到C57BL/6J小鼠中,构建稳定高表达MTA1的小鼠模型.方法 通过RT-PCR方法克隆人的MTA1编码序列,将MTA1插入真核表达载体pcDNA3.1构建pcDNA3.1-MTA1载体,回收片段后利用显微注射技术将目的基因片段注入到受精卵的雄原核中,使用MTA1特异性的引物经PCR鉴定出基因型阳性的转基因小鼠,再利用Western-blot及免疫组化方法检测MTA1在转基因小鼠全身级织表达情况.结果 成功构建了MTA1转基因注射片段.在320枚显微注射受精卵中挑选出300枚存活卵移植到10只ICR小鼠假孕受体的输卵管中,10只ICR小鼠均怀孕,移植成功率为100％,共生出子代鼠80只,经PCR检测其中共有9只整合了MTA1基因,整合率为11.25％.经PCR鉴定MTA1整合阳性的F1代小鼠,再经Western-blot和免疫组化分析检测MTA1表达水平在脑、肺、肝、肠等组织中表达明显增高,肾、骨骼肌表达无差异.结论 成功构建了脑、肝、肺、结肠高表达MTA1的转基因小鼠,为进一步MTA1研究奠定了良好的研究模型.
目的 將人的MTA1外源基因整閤到C57BL/6J小鼠中,構建穩定高錶達MTA1的小鼠模型.方法 通過RT-PCR方法剋隆人的MTA1編碼序列,將MTA1插入真覈錶達載體pcDNA3.1構建pcDNA3.1-MTA1載體,迴收片段後利用顯微註射技術將目的基因片段註入到受精卵的雄原覈中,使用MTA1特異性的引物經PCR鑒定齣基因型暘性的轉基因小鼠,再利用Western-blot及免疫組化方法檢測MTA1在轉基因小鼠全身級織錶達情況.結果 成功構建瞭MTA1轉基因註射片段.在320枚顯微註射受精卵中挑選齣300枚存活卵移植到10隻ICR小鼠假孕受體的輸卵管中,10隻ICR小鼠均懷孕,移植成功率為100％,共生齣子代鼠80隻,經PCR檢測其中共有9隻整閤瞭MTA1基因,整閤率為11.25％.經PCR鑒定MTA1整閤暘性的F1代小鼠,再經Western-blot和免疫組化分析檢測MTA1錶達水平在腦、肺、肝、腸等組織中錶達明顯增高,腎、骨骼肌錶達無差異.結論 成功構建瞭腦、肝、肺、結腸高錶達MTA1的轉基因小鼠,為進一步MTA1研究奠定瞭良好的研究模型.
목적 장인적MTA1외원기인정합도C57BL/6J소서중,구건은정고표체MTA1적소서모형.방법 통과RT-PCR방법극륭인적MTA1편마서렬,장MTA1삽입진핵표체재체pcDNA3.1구건pcDNA3.1-MTA1재체,회수편단후이용현미주사기술장목적기인편단주입도수정란적웅원핵중,사용MTA1특이성적인물경PCR감정출기인형양성적전기인소서,재이용Western-blot급면역조화방법검측MTA1재전기인소서전신급직표체정황.결과 성공구건료MTA1전기인주사편단.재320매현미주사수정란중도선출300매존활란이식도10지ICR소서가잉수체적수란관중,10지ICR소서균부잉,이식성공솔위100％,공생출자대서80지,경PCR검측기중공유9지정합료MTA1기인,정합솔위11.25％.경PCR감정MTA1정합양성적F1대소서,재경Western-blot화면역조화분석검측MTA1표체수평재뇌、폐、간、장등조직중표체명현증고,신、골격기표체무차이.결론 성공구건료뇌、간、폐、결장고표체MTA1적전기인소서,위진일보MTA1연구전정료량호적연구모형.
