生物加工过程
生物加工過程
생물가공과정
CHINESE JOURNAL OF BIOPROCESS ENGINEERING
2013年
3期
52-58
,共7页
杨立红%程仕伟%冯志彬%周楠楠%孔云红%明永飞
楊立紅%程仕偉%馮誌彬%週楠楠%孔雲紅%明永飛
양립홍%정사위%풍지빈%주남남%공운홍%명영비
酶学性质%壳聚糖酶%分离纯化%链霉菌
酶學性質%殼聚糖酶%分離純化%鏈黴菌
매학성질%각취당매%분리순화%련매균
catalytic property%chitosanase%bioseparation%Streptomyces hygroscopious
分离纯化从烟台近海土壤筛选的链霉菌来源壳聚糖酶,并对其酶学性质进行研究.通过(NH4)2SO4分级沉淀分离得粗酶,透析后经Sephadex G-100柱纯化,得到2种壳聚糖酶(ChA和ChB).SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Sephadex G-75凝胶过滤确定ChA的相对分子质量,研究ChA的最适底物水解条件、热稳定性、水解动力学及金属离子对酶活性影响.结果表明:ChA为单亚基蛋白,相对分子质量为4.16×104,在220和280 nm处呈现两个紫外吸收峰,催化水解壳聚糖的最适pH为5.0～5.5,最适温度为55℃.热稳定性实验表明:30℃温育1h后酶活为初始酶活的33.3％,40℃温育1h后酶活为初始酶活的22.2％.ChA的酶促反应初速率为6.2×10-3 μmol/(mL· min),Vmax为0.318 μmol/(mL·min),Km为1×10-2mg/mL,且对底物表现相对专一性.K+、Na+、Li+、Mg2+、Ca2+、Ba2+ Zn2+、Cu2+和Co2+对ChA活力均表现为抑制作用,过渡金属离子Mn2+对酶有激活作用,重金属离子Hg2+、Ag+、Cd2+和pb2+对酶均有较强的抑制作用.Mn2+和Zn2+的动力学研究表明,Mn2+对酶为混合型激活作用,Zn2+对酶为竞争性抑制作用.
分離純化從煙檯近海土壤篩選的鏈黴菌來源殼聚糖酶,併對其酶學性質進行研究.通過(NH4)2SO4分級沉澱分離得粗酶,透析後經Sephadex G-100柱純化,得到2種殼聚糖酶(ChA和ChB).SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳及Sephadex G-75凝膠過濾確定ChA的相對分子質量,研究ChA的最適底物水解條件、熱穩定性、水解動力學及金屬離子對酶活性影響.結果錶明:ChA為單亞基蛋白,相對分子質量為4.16×104,在220和280 nm處呈現兩箇紫外吸收峰,催化水解殼聚糖的最適pH為5.0～5.5,最適溫度為55℃.熱穩定性實驗錶明:30℃溫育1h後酶活為初始酶活的33.3％,40℃溫育1h後酶活為初始酶活的22.2％.ChA的酶促反應初速率為6.2×10-3 μmol/(mL· min),Vmax為0.318 μmol/(mL·min),Km為1×10-2mg/mL,且對底物錶現相對專一性.K+、Na+、Li+、Mg2+、Ca2+、Ba2+ Zn2+、Cu2+和Co2+對ChA活力均錶現為抑製作用,過渡金屬離子Mn2+對酶有激活作用,重金屬離子Hg2+、Ag+、Cd2+和pb2+對酶均有較彊的抑製作用.Mn2+和Zn2+的動力學研究錶明,Mn2+對酶為混閤型激活作用,Zn2+對酶為競爭性抑製作用.
분리순화종연태근해토양사선적련매균래원각취당매,병대기매학성질진행연구.통과(NH4)2SO4분급침정분리득조매,투석후경Sephadex G-100주순화,득도2충각취당매(ChA화ChB).SDS-취병희선알응효전영급Sephadex G-75응효과려학정ChA적상대분자질량,연구ChA적최괄저물수해조건、열은정성、수해동역학급금속리자대매활성영향.결과표명:ChA위단아기단백,상대분자질량위4.16×104,재220화280 nm처정현량개자외흡수봉,최화수해각취당적최괄pH위5.0～5.5,최괄온도위55℃.열은정성실험표명:30℃온육1h후매활위초시매활적33.3％,40℃온육1h후매활위초시매활적22.2％.ChA적매촉반응초속솔위6.2×10-3 μmol/(mL· min),Vmax위0.318 μmol/(mL·min),Km위1×10-2mg/mL,차대저물표현상대전일성.K+、Na+、Li+、Mg2+、Ca2+、Ba2+ Zn2+、Cu2+화Co2+대ChA활력균표현위억제작용,과도금속리자Mn2+대매유격활작용,중금속리자Hg2+、Ag+、Cd2+화pb2+대매균유교강적억제작용.Mn2+화Zn2+적동역학연구표명,Mn2+대매위혼합형격활작용,Zn2+대매위경쟁성억제작용.
