CAJ | 학술논문

目的:研究缺氧细胞中的Notch信号对小鼠结肠癌细胞体内生长的影响.方法:将缺氧诱导因子 (hypoxia-inducible factor,HIF)- 1α中的氧依赖性蛋白降解结构域(oxygen-dependent degradation domain,ODD)、抑制Notch信号的mastermind样(mastermind-like,MAML)突变体蛋白1和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)重组构建融合蛋白表达载体.通过在免疫荧光显微镜下观察荧光强度,应用Western 印迹和实时荧光定量PCR(real-time fluorogentic quantitative-PCR,RFQ-PCR)检测融合蛋白对缺氧的反应性和抑制Notch信号的能力.通过失巢凋亡实验和小鼠体内肿瘤形成实验,观察融合蛋白DNMAML1-ODD-GFP(DOG)对CT26结肠癌细胞体外失巢凋亡和小鼠体内肿瘤生长的影响.结果:DOG融合蛋白在细胞中的稳定表达依赖于缺氧条件,该融合蛋白能够靶向抑制缺氧CT26细胞中的Notch信号靶基因Hes1 mRNA的表达(P<0.01).体外失巢凋亡实验表明,DOG融合蛋白可显著促进缺氧CT26细胞的失巢凋亡(P<0.01).小鼠体内成瘤实验显示,DOG融合蛋白的表达可抑制结肠癌细胞CT26在小鼠体内的生长(P<0.01).结论:成功构建了靶向阻断缺氧细胞中Notch信号的融合蛋白表达载体.缺氧结肠癌细胞中的Notch信号对于肿瘤生长起重要作用.
목적:연구결양세포중적Notch신호대소서결장암세포체내생장적영향.방법:장결양유도인자 (hypoxia-inducible factor,HIF)- 1α중적양의뢰성단백강해결구역(oxygen-dependent degradation domain,ODD)、억제Notch신호적mastermind양(mastermind-like,MAML)돌변체단백1화록색형광단백(green fluorescent protein, GFP)중조구건융합단백표체재체.통과재면역형광현미경하관찰형광강도,응용Western 인적화실시형광정량PCR(real-time fluorogentic quantitative-PCR,RFQ-PCR)검측융합단백대결양적반응성화억제Notch신호적능력.통과실소조망실험화소서체내종류형성실험,관찰융합단백DNMAML1-ODD-GFP(DOG)대CT26결장암세포체외실소조망화소서체내종류생장적영향.결과:DOG융합단백재세포중적은정표체의뢰우결양조건,해융합단백능구파향억제결양CT26세포중적Notch신호파기인Hes1 mRNA적표체(P<0.01).체외실소조망실험표명,DOG융합단백가현저촉진결양CT26세포적실소조망(P<0.01).소서체내성류실험현시,DOG융합단백적표체가억제결장암세포CT26재소서체내적생장(P<0.01).결론:성공구건료파향조단결양세포중Notch신호적융합단백표체재체.결양결장암세포중적Notch신호대우종류생장기중요작용.