中国实验血液学杂志
中國實驗血液學雜誌
중국실험혈액학잡지
JOURNAL OF EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
2008年
4期
892-897
,共6页
杨磊%刘复强%王景文%吴轶萍%丁璟
楊磊%劉複彊%王景文%吳軼萍%丁璟
양뢰%류복강%왕경문%오질평%정경
树突状细胞%亚硒酸钠%白血病%K562细胞%IL-12
樹突狀細胞%亞硒痠鈉%白血病%K562細胞%IL-12
수돌상세포%아서산납%백혈병%K562세포%IL-12
本研究探讨经亚硒酸钠(Na2SeO3)处理、K562细胞裂解物冲击致敏的外周血衍生的树突状细胞(DC)的生物学特性和体外诱导抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答的能力.健康人外周血单个核细胞(PBMNC)于体外在含3种细胞因子(rhGM-CSF、rhIL-4、TNF-α)的RPMI 1640+10%FBS培养液中培养4天,收获贴壁细胞,实验分4组:DCⅠ组:仅舍DC;DCⅡ组:DC+Se(0.5 μmol/L);DCⅢ组:DC+K562细胞裂解液;DCⅣ组:在DCⅢ组中加入Se(0.5 μmol/L).在培养的第7天于倒置显微镜下进行活细胞观察.用流式细胞术(FCM)检测细胞袁型CD1a、CD40、CD83、CD86.乳酸脱氢酶(LDH)释放试验检测CTL效应.用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定IL-12含量.结果表明:各组DC均具有典型树突状细胞形态,均较培养前集落增多.DCⅠ组和DCⅡ组的细胞形态及数量无明显差异,DCⅢ组和DCⅣ组的细胞集落数量增加,悬浮细胞比例增加.各组DC细胞的CD1a、CD40、CD83、CD86表达率较PBMNC明显增高(P＜0.01),各组间DC细胞的CD1a和CD40的表达率无明显差异,DCⅢ组和DCⅣ组的CD83和cD86的表达率均高于DCⅠ组和DCⅡ组(P＜0.01),DCⅠ和DCⅡ以及DCⅢ和DCⅣ两组之间CD83和CD86表达率均无明显差异.在效靶比例为25:1时,各组DC致敏的T淋巴细胞对K562细胞的杀伤率为15.3±2.3%、26.3±3.7%、28.2±4.5%和36.2±3.7%,均明显高于未经DC致敏的单独T淋巴细胞组(5.9±2.4%)(P＜0.01),DCⅣ组的CTL效应最强,高于DCⅠ、Ⅱ、Ⅲ组(P＜0.01),DCⅡ和DCⅢ组的CTL效应也高于DCⅠ组(P＜0.01).而DCⅡ和DCⅢ两组间CTL效应程度无明显差异(P＞0.05);各组DC与T淋巴细胞共培养的上清液中IL-12水平为256.96±64.2、328.12±43.9、322.98±53.5和353.85±46.2 pg/ml,均显著高于未经DC致敏的单独T淋巴细胞组(35.27±27.1)pg/ml(p＜0.01),DCⅡ、DCⅢ和DCⅣ组的IL-12水平均高于DC-Ⅰ组(p＜0.01),而其在DCⅡ、Ⅲ和DCⅣ 3组间无明显差异(P＞0.05).结论:应用舍细胞因子(rh-GM-CSF、IL-4和TNF-α)的体外培养体系可从健康人的PBMNC中收获成熟DC细胞,经K562细胞裂解液冲击致敏可以促进DC的黏附分子与共刺激分子(CD83、CD86)的表达,并可促进DC分泌IL-12和诱导特异性杀伤靶细胞的CTL效应;小剂量亚硒酸钠(0.5μmol/L)对体外培养体系收获DC的形态和数量以及DC成熟标志的表达均无明显影响,它促进DC分泌IL-12及诱导CTL效应与K562细胞裂解液致敏的DC相当,并在诱导CTL效应中与后者有协同作用.
本研究探討經亞硒痠鈉(Na2SeO3)處理、K562細胞裂解物遲擊緻敏的外週血衍生的樹突狀細胞(DC)的生物學特性和體外誘導抗原特異性細胞毒性T淋巴細胞(CTL)應答的能力.健康人外週血單箇覈細胞(PBMNC)于體外在含3種細胞因子(rhGM-CSF、rhIL-4、TNF-α)的RPMI 1640+10%FBS培養液中培養4天,收穫貼壁細胞,實驗分4組:DCⅠ組:僅捨DC;DCⅡ組:DC+Se(0.5 μmol/L);DCⅢ組:DC+K562細胞裂解液;DCⅣ組:在DCⅢ組中加入Se(0.5 μmol/L).在培養的第7天于倒置顯微鏡下進行活細胞觀察.用流式細胞術(FCM)檢測細胞袁型CD1a、CD40、CD83、CD86.乳痠脫氫酶(LDH)釋放試驗檢測CTL效應.用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)測定IL-12含量.結果錶明:各組DC均具有典型樹突狀細胞形態,均較培養前集落增多.DCⅠ組和DCⅡ組的細胞形態及數量無明顯差異,DCⅢ組和DCⅣ組的細胞集落數量增加,懸浮細胞比例增加.各組DC細胞的CD1a、CD40、CD83、CD86錶達率較PBMNC明顯增高(P＜0.01),各組間DC細胞的CD1a和CD40的錶達率無明顯差異,DCⅢ組和DCⅣ組的CD83和cD86的錶達率均高于DCⅠ組和DCⅡ組(P＜0.01),DCⅠ和DCⅡ以及DCⅢ和DCⅣ兩組之間CD83和CD86錶達率均無明顯差異.在效靶比例為25:1時,各組DC緻敏的T淋巴細胞對K562細胞的殺傷率為15.3±2.3%、26.3±3.7%、28.2±4.5%和36.2±3.7%,均明顯高于未經DC緻敏的單獨T淋巴細胞組(5.9±2.4%)(P＜0.01),DCⅣ組的CTL效應最彊,高于DCⅠ、Ⅱ、Ⅲ組(P＜0.01),DCⅡ和DCⅢ組的CTL效應也高于DCⅠ組(P＜0.01).而DCⅡ和DCⅢ兩組間CTL效應程度無明顯差異(P＞0.05);各組DC與T淋巴細胞共培養的上清液中IL-12水平為256.96±64.2、328.12±43.9、322.98±53.5和353.85±46.2 pg/ml,均顯著高于未經DC緻敏的單獨T淋巴細胞組(35.27±27.1)pg/ml(p＜0.01),DCⅡ、DCⅢ和DCⅣ組的IL-12水平均高于DC-Ⅰ組(p＜0.01),而其在DCⅡ、Ⅲ和DCⅣ 3組間無明顯差異(P＞0.05).結論:應用捨細胞因子(rh-GM-CSF、IL-4和TNF-α)的體外培養體繫可從健康人的PBMNC中收穫成熟DC細胞,經K562細胞裂解液遲擊緻敏可以促進DC的黏附分子與共刺激分子(CD83、CD86)的錶達,併可促進DC分泌IL-12和誘導特異性殺傷靶細胞的CTL效應;小劑量亞硒痠鈉(0.5μmol/L)對體外培養體繫收穫DC的形態和數量以及DC成熟標誌的錶達均無明顯影響,它促進DC分泌IL-12及誘導CTL效應與K562細胞裂解液緻敏的DC相噹,併在誘導CTL效應中與後者有協同作用.
본연구탐토경아서산납(Na2SeO3)처리、K562세포렬해물충격치민적외주혈연생적수돌상세포(DC)적생물학특성화체외유도항원특이성세포독성T림파세포(CTL)응답적능력.건강인외주혈단개핵세포(PBMNC)우체외재함3충세포인자(rhGM-CSF、rhIL-4、TNF-α)적RPMI 1640+10%FBS배양액중배양4천,수획첩벽세포,실험분4조:DCⅠ조:부사DC;DCⅡ조:DC+Se(0.5 μmol/L);DCⅢ조:DC+K562세포렬해액;DCⅣ조:재DCⅢ조중가입Se(0.5 μmol/L).재배양적제7천우도치현미경하진행활세포관찰.용류식세포술(FCM)검측세포원형CD1a、CD40、CD83、CD86.유산탈경매(LDH)석방시험검측CTL효응.용매련면역흡부시험(ELISA)측정IL-12함량.결과표명:각조DC균구유전형수돌상세포형태,균교배양전집락증다.DCⅠ조화DCⅡ조적세포형태급수량무명현차이,DCⅢ조화DCⅣ조적세포집락수량증가,현부세포비례증가.각조DC세포적CD1a、CD40、CD83、CD86표체솔교PBMNC명현증고(P＜0.01),각조간DC세포적CD1a화CD40적표체솔무명현차이,DCⅢ조화DCⅣ조적CD83화cD86적표체솔균고우DCⅠ조화DCⅡ조(P＜0.01),DCⅠ화DCⅡ이급DCⅢ화DCⅣ량조지간CD83화CD86표체솔균무명현차이.재효파비례위25:1시,각조DC치민적T림파세포대K562세포적살상솔위15.3±2.3%、26.3±3.7%、28.2±4.5%화36.2±3.7%,균명현고우미경DC치민적단독T림파세포조(5.9±2.4%)(P＜0.01),DCⅣ조적CTL효응최강,고우DCⅠ、Ⅱ、Ⅲ조(P＜0.01),DCⅡ화DCⅢ조적CTL효응야고우DCⅠ조(P＜0.01).이DCⅡ화DCⅢ량조간CTL효응정도무명현차이(P＞0.05);각조DC여T림파세포공배양적상청액중IL-12수평위256.96±64.2、328.12±43.9、322.98±53.5화353.85±46.2 pg/ml,균현저고우미경DC치민적단독T림파세포조(35.27±27.1)pg/ml(p＜0.01),DCⅡ、DCⅢ화DCⅣ조적IL-12수평균고우DC-Ⅰ조(p＜0.01),이기재DCⅡ、Ⅲ화DCⅣ 3조간무명현차이(P＞0.05).결론:응용사세포인자(rh-GM-CSF、IL-4화TNF-α)적체외배양체계가종건강인적PBMNC중수획성숙DC세포,경K562세포렬해액충격치민가이촉진DC적점부분자여공자격분자(CD83、CD86)적표체,병가촉진DC분비IL-12화유도특이성살상파세포적CTL효응;소제량아서산납(0.5μmol/L)대체외배양체계수획DC적형태화수량이급DC성숙표지적표체균무명현영향,타촉진DC분비IL-12급유도CTL효응여K562세포렬해액치민적DC상당,병재유도CTL효응중여후자유협동작용.
