西北农林科技大学学报（自然科学版）
西北農林科技大學學報（自然科學版）
서북농림과기대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF NORTHWEST SCI-TECH UNIVERSITY OF AGRICULTURE AND FORESTRY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2008年
7期
9-13
,共5页
陈昌海%程雷%徐正军%郝桂兰%刘耀兴%袁日进%陆承平
陳昌海%程雷%徐正軍%郝桂蘭%劉耀興%袁日進%陸承平
진창해%정뢰%서정군%학계란%류요흥%원일진%륙승평
Asia I型口蹄疫病毒%VP1基因%原核表达
Asia I型口蹄疫病毒%VP1基因%原覈錶達
Asia I형구제역병독%VP1기인%원핵표체
[目的]实现牛口蹄疫病毒AsiaⅠ型江苏分离株VP1基因在大肠杆菌中的表达,为VP1蛋白的深入研究奠定基础.[方法]根据GenBank公布的AsiaⅠ型口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)核苷酸序列(登录号:AF030244),设计并合成1对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增出牛Asia Ⅰ型FMDV江苏分离株VP1基因,将其连接人pMD18-T载体,测序后克隆入原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核表达载体pET-VP1.阳性重组质粒转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,收集表达产物并进行SDS-PAGE电泳,利用West-ern-blot分析表达蛋白的抗原性.[结果]牛Aisa Ⅰ型FMDV VP1基因在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物的相对分子质量约为43 ku,并能被牛AsiaⅠ型FMDV阳性血清识别,有一定的生物学活性,表达量约占菌体蛋白总量的37.7%.[结沦]牛Asia Ⅰ型FMDV VP1基因表达成功,且表达产物具有一定的生物学活性.
[目的]實現牛口蹄疫病毒AsiaⅠ型江囌分離株VP1基因在大腸桿菌中的錶達,為VP1蛋白的深入研究奠定基礎.[方法]根據GenBank公佈的AsiaⅠ型口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)覈苷痠序列(登錄號:AF030244),設計併閤成1對特異性引物,應用RT-PCR方法擴增齣牛Asia Ⅰ型FMDV江囌分離株VP1基因,將其連接人pMD18-T載體,測序後剋隆入原覈錶達載體pET-32a(+)中,構建原覈錶達載體pET-VP1.暘性重組質粒轉化感受態大腸桿菌BL21(DE3),用IPTG進行誘導錶達,收集錶達產物併進行SDS-PAGE電泳,利用West-ern-blot分析錶達蛋白的抗原性.[結果]牛Aisa Ⅰ型FMDV VP1基因在大腸桿菌中穫得高效錶達,錶達產物的相對分子質量約為43 ku,併能被牛AsiaⅠ型FMDV暘性血清識彆,有一定的生物學活性,錶達量約佔菌體蛋白總量的37.7%.[結淪]牛Asia Ⅰ型FMDV VP1基因錶達成功,且錶達產物具有一定的生物學活性.
[목적]실현우구제역병독AsiaⅠ형강소분리주VP1기인재대장간균중적표체,위VP1단백적심입연구전정기출.[방법]근거GenBank공포적AsiaⅠ형구제역병독(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)핵감산서렬(등록호:AF030244),설계병합성1대특이성인물,응용RT-PCR방법확증출우Asia Ⅰ형FMDV강소분리주VP1기인,장기련접인pMD18-T재체,측서후극륭입원핵표체재체pET-32a(+)중,구건원핵표체재체pET-VP1.양성중조질립전화감수태대장간균BL21(DE3),용IPTG진행유도표체,수집표체산물병진행SDS-PAGE전영,이용West-ern-blot분석표체단백적항원성.[결과]우Aisa Ⅰ형FMDV VP1기인재대장간균중획득고효표체,표체산물적상대분자질량약위43 ku,병능피우AsiaⅠ형FMDV양성혈청식별,유일정적생물학활성,표체량약점균체단백총량적37.7%.[결륜]우Asia Ⅰ형FMDV VP1기인표체성공,차표체산물구유일정적생물학활성.
