CAJ | 학술논문

目的研究CoCl2对体外培养的鼠下颌骨成骨细胞的作用,观察缺氧条件对成骨细胞VEGF及TGF-β1表达的影响,为临床牵张成骨技术的分子生物学机制研究提供理论依据.方法取新生24 h内Wistar大鼠下颌骨,改良酶消化法培养和纯化成骨细胞,采用HE染色、ALP组织化学染色、Ⅰ型胶原免疫组织化学、钙结节染色行细胞形态学及组织学鉴定,并绘制生长曲线.取第3代最佳生长状态的鼠下颌骨成骨细胞,用150μmol/L CoCl2处理(实验组),设正常状态下培养为对照组,分别于培养后0、3、6、9、12、24 h,采用免疫荧光技术检测VEGF及TGF-β1表达.结果 HE染色示成骨细胞形态多样,呈三角形、多角形、圆形及鳞片形等不规则形态,突起长短不一向外伸展,胞核清晰可见;胞浆丰富,呈粉红色,胞核蓝紫色,有时可见2个细胞核,密集处细胞形态不明显,分界模糊,仅见大圆核细胞.ALP组织化学染色示细胞胞质呈黑色颗粒,细胞核轮廓不清,细胞密集区可见大量阳性细胞.Ⅰ型胶原免疫组织化学染色示实验组阳性细胞均匀可见,胞浆呈棕黄色,胞核周围尤为明显,空白对照组细胞未见棕黄色颗粒.钙结节染色示成骨细胞于盖玻片上培养15 d后,细胞聚集成不透明区域,呈结节样;茜素红染色后,有橙红色着色.培养各时间点对照组细胞激光共聚焦显微镜下可见较弱的VEGF表达荧光;实验组细胞随缺氧时间延长,VEGF表达荧光强度值增加,于术后9 h达高峰,随后降至正常水平.培养各时间点激光共聚焦显微镜下可见两组细胞均有TGF-β1表达荧光,对照组各时间点荧光强度值均略高于VEGF对照组;实验组TGF-β1表达在缺氧3 h短期成倍增加,随缺氧时间延长表达逐渐降低.结论经新生大鼠下颌骨培养的成骨细胞性状稳定;适当缺氧可诱导成骨细胞VEGF和TGF-β1表达增强.
목적 연구CoCl2대체외배양적서하합골성골세포적작용,관찰결양조건대성골세포VEGF급TGF-β1표체적영향,위림상견장성골기술적분자생물학궤제연구제공이론의거.방법 취신생24 h내Wistar대서하합골,개량매소화법배양화순화성골세포,채용HE염색、ALP조직화학염색、Ⅰ형효원면역조직화학、개결절염색행세포형태학급조직학감정,병회제생장곡선.취제3대최가생장상태적서하합골성골세포,용150μmol/L CoCl2처리(실험조),설정상상태하배양위대조조,분별우배양후0、3、6、9、12、24 h,채용면역형광기술검측VEGF급TGF-β1표체.결과 HE염색시성골세포형태다양,정삼각형、다각형、원형급린편형등불규칙형태,돌기장단불일향외신전,포핵청석가견;포장봉부,정분홍색,포핵람자색,유시가견2개세포핵,밀집처세포형태불명현,분계모호,부견대원핵세포.ALP조직화학염색시세포포질정흑색과립,세포핵륜곽불청,세포밀집구가견대량양성세포.Ⅰ형효원면역조직화학염색시실험조양성세포균균가견,포장정종황색,포핵주위우위명현,공백대조조세포미견종황색과립.개결절염색시성골세포우개파편상배양15 d후,세포취집성불투명구역,정결절양;천소홍염색후,유등홍색착색.배양각시간점대조조세포격광공취초현미경하가견교약적VEGF표체형광;실험조세포수결양시간연장,VEGF표체형광강도치증가,우술후9 h체고봉,수후강지정상수평.배양각시간점격광공취초현미경하가견량조세포균유TGF-β1표체형광,대조조각시간점형광강도치균략고우VEGF대조조;실험조TGF-β1표체재결양3 h단기성배증가,수결양시간연장표체축점강저.결론 경신생대서하합골배양적성골세포성상은정;괄당결양가유도성골세포VEGF화TGF-β1표체증강.