生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2008年
4期
161-165
,共5页
赵素芬%张婷%应成琦%何培民
趙素芬%張婷%應成琦%何培民
조소분%장정%응성기%하배민
长心卡帕藻%DNA提取%随机扩增DNA多态性%反应体系
長心卡帕藻%DNA提取%隨機擴增DNA多態性%反應體繫
장심잡파조%DNA제취%수궤확증DNA다태성%반응체계
采用SDS(十二烷基硫酸钠,20%)法提取了大型海藻长心卡帕藻(Kappaphycus alvarezii)基因组DNA.通过单因子梯度试验,确定了影响随机扩增DNA多态性(RAPD)扩增结果的模板、Mg2+、dNTPs、S22引物、Taq的适宜浓度、退火温度和反应的最佳循环次数;利用正交试验优化了模板、Mg2+、dNTPs、S22引物、Taq的配比浓度.结果表明,在进行长心卡帕藻的RAPD扩增时,在总体积为25μl的反应体系中,模板、Mg2+、dNTPs、S22引物、Taq的最佳浓度分别为15ng、2.0mmol/L、0.2mmol/L、0.25μmol/L、2.5U;退火温度为37℃.反应程序为94℃预变性5min,然后经94℃变性30s、37℃退火1min.72℃延伸2min,进行30次循环,最后在72℃再延伸10min.
採用SDS(十二烷基硫痠鈉,20%)法提取瞭大型海藻長心卡帕藻(Kappaphycus alvarezii)基因組DNA.通過單因子梯度試驗,確定瞭影響隨機擴增DNA多態性(RAPD)擴增結果的模闆、Mg2+、dNTPs、S22引物、Taq的適宜濃度、退火溫度和反應的最佳循環次數;利用正交試驗優化瞭模闆、Mg2+、dNTPs、S22引物、Taq的配比濃度.結果錶明,在進行長心卡帕藻的RAPD擴增時,在總體積為25μl的反應體繫中,模闆、Mg2+、dNTPs、S22引物、Taq的最佳濃度分彆為15ng、2.0mmol/L、0.2mmol/L、0.25μmol/L、2.5U;退火溫度為37℃.反應程序為94℃預變性5min,然後經94℃變性30s、37℃退火1min.72℃延伸2min,進行30次循環,最後在72℃再延伸10min.
채용SDS(십이완기류산납,20%)법제취료대형해조장심잡파조(Kappaphycus alvarezii)기인조DNA.통과단인자제도시험,학정료영향수궤확증DNA다태성(RAPD)확증결과적모판、Mg2+、dNTPs、S22인물、Taq적괄의농도、퇴화온도화반응적최가순배차수;이용정교시험우화료모판、Mg2+、dNTPs、S22인물、Taq적배비농도.결과표명,재진행장심잡파조적RAPD확증시,재총체적위25μl적반응체계중,모판、Mg2+、dNTPs、S22인물、Taq적최가농도분별위15ng、2.0mmol/L、0.2mmol/L、0.25μmol/L、2.5U;퇴화온도위37℃.반응정서위94℃예변성5min,연후경94℃변성30s、37℃퇴화1min.72℃연신2min,진행30차순배,최후재72℃재연신10min.
