结核分枝杆菌体内特异表达基因mshA的克隆表达及免疫组织化学分析
결핵분지간균체내특이표체기인mshA적극륭표체급면역조직화학분석
The cloning expression and immunohistochemistry analysis of mshA in Mycobacterium tuberculosis in vivo
  • 万方数据
    中华实验和临床感染病杂志（电子版） 중화실험화림상감염병잡지（전자판）
    CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL AND CLINICAL INFECTIOUS DISEASES(ELECTRONIC VERSION)
    2013年 1期 5-10 ,共6页

    李自慧%杜博平%贾红彦%张海青%周丽娟%邢爱英%曹廷明%郑晓静%陈曦%张宗德

    리자혜%두박평%가홍언%장해청%주려연%형애영%조정명%정효정%진희%장종덕

    结核分枝杆菌%抗体%免疫组织化学 結覈分枝桿菌%抗體%免疫組織化學
    결핵분지간균%항체%면역조직화학
    目的 克隆、表达结核分枝杆菌体内特异表达基因mshA,并制备多克隆抗体进行免疫组织化学分析,研究其免疫原性、免疫反应性及体内表达情况.方法 采用高保真PCR法扩增结核分枝杆菌mshA基因,将基因克隆入表达载体pET30a(+),证实序列正确后转化入大肠埃希菌BL21(DE3),并采用IPTG诱导表达.将重组蛋白大量表达纯化后免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体并进行亲和纯化,用重组MSHA蛋白与其多克隆抗体进行Western blot鉴定.制备感染结核分枝杆菌的小鼠肺组织病理切片,尝试用免疫组织化学和抗酸染色法检测感染小鼠肺组织中结核分枝杆菌MSHA蛋白的表达.结果 成功扩增片段大小为1443 bp的mshA基因,构建了pET30a(+):mshA重组表达载体,对57 kD的重组蛋白进行了大量表达及纯化,浓度为4 mg/ml.重组蛋白免疫新西兰大白兔后获得效价达25 600的多克隆抗体,纯化后的多克隆抗体浓度为5.58 mg/ml,效价仍达25 600.免疫组织化学和抗酸染色显示,小鼠肺组织切片中结核分枝杆菌分布处有深棕色MSHA免疫组织化学反应颗粒.结论 结核分枝杆菌MSHA蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性,小鼠肺组织内的结核分枝杆菌中存在该蛋白的表达.
    목적 극륭、표체결핵분지간균체내특이표체기인mshA,병제비다극륭항체진행면역조직화학분석,연구기면역원성、면역반응성급체내표체정황.방법 채용고보진PCR법확증결핵분지간균mshA기인,장기인극륭입표체재체pET30a(+),증실서렬정학후전화입대장애희균BL21(DE3),병채용IPTG유도표체.장중조단백대량표체순화후면역신서란대백토,제비다극륭항체병진행친화순화,용중조MSHA단백여기다극륭항체진행Western blot감정.제비감염결핵분지간균적소서폐조직병리절편,상시용면역조직화학화항산염색법검측감염소서폐조직중결핵분지간균MSHA단백적표체.결과 성공확증편단대소위1443 bp적mshA기인,구건료pET30a(+):mshA중조표체재체,대57 kD적중조단백진행료대량표체급순화,농도위4 mg/ml.중조단백면역신서란대백토후획득효개체25 600적다극륭항체,순화후적다극륭항체농도위5.58 mg/ml,효개잉체25 600.면역조직화학화항산염색현시,소서폐조직절편중결핵분지간균분포처유심종색MSHA면역조직화학반응과립.결론 결핵분지간균MSHA단백구유량호적면역원성화면역반응성,소서폐조직내적결핵분지간균중존재해단백적표체.
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