生物学杂志
生物學雜誌
생물학잡지
JOURNAL OF BIOLOGY
2013年
2期
5-9
,共5页
刘建%朱德锐%李逸%李丹丹%李耀东%刘德立
劉建%硃德銳%李逸%李丹丹%李耀東%劉德立
류건%주덕예%리일%리단단%리요동%류덕립
青海湖%四氢嘧啶%染色体步移%ectABC基因簇%克隆表达
青海湖%四氫嘧啶%染色體步移%ectABC基因簇%剋隆錶達
청해호%사경밀정%염색체보이%ectABC기인족%극륭표체
从青海湖20份水样筛选得到一株优势中度嗜盐菌QHL1,经初步鉴定为盐单胞菌属.设计保守基因ectB的引物,以基因组DNA为模板,PCR扩增获得ectB基因(1269 bp).利用染色体步移技术,克隆获得四氢嘧啶合成基因簇ectABC及其上下游调控序列.DNAStar软件分析表明ectA、ectB和ectC位于同一个操纵子上,大小分别为579 bp、1269 bp和390 bp,预测分别编码192、422和129个氨基酸的肽链.同源性分析表明:Halomonas sp.QHL1 ectABC基因簇所编码的二氨基丁酸转乙酰基酶(EctA)、二氨基丁酸转氨酶(EctB)和四氢嘧啶合成酶(EctC)与Halomonas sp.Nj223 ectABC基因簇所编码的酶蛋白相似性分别达57%、96%和85%.利用分子克隆技术构建二氨基丁酸转氨酶基因ectB的重组表达载体pET-28-ectB,通过限制性内切酶酶切和测序分析,结果表明其目的基因的插入位置、大小和读码框均正确.诱导表达重组菌,SDS-PAGE分析,目的蛋白条带约46 kDa.
從青海湖20份水樣篩選得到一株優勢中度嗜鹽菌QHL1,經初步鑒定為鹽單胞菌屬.設計保守基因ectB的引物,以基因組DNA為模闆,PCR擴增穫得ectB基因(1269 bp).利用染色體步移技術,剋隆穫得四氫嘧啶閤成基因簇ectABC及其上下遊調控序列.DNAStar軟件分析錶明ectA、ectB和ectC位于同一箇操縱子上,大小分彆為579 bp、1269 bp和390 bp,預測分彆編碼192、422和129箇氨基痠的肽鏈.同源性分析錶明:Halomonas sp.QHL1 ectABC基因簇所編碼的二氨基丁痠轉乙酰基酶(EctA)、二氨基丁痠轉氨酶(EctB)和四氫嘧啶閤成酶(EctC)與Halomonas sp.Nj223 ectABC基因簇所編碼的酶蛋白相似性分彆達57%、96%和85%.利用分子剋隆技術構建二氨基丁痠轉氨酶基因ectB的重組錶達載體pET-28-ectB,通過限製性內切酶酶切和測序分析,結果錶明其目的基因的插入位置、大小和讀碼框均正確.誘導錶達重組菌,SDS-PAGE分析,目的蛋白條帶約46 kDa.
종청해호20빈수양사선득도일주우세중도기염균QHL1,경초보감정위염단포균속.설계보수기인ectB적인물,이기인조DNA위모판,PCR확증획득ectB기인(1269 bp).이용염색체보이기술,극륭획득사경밀정합성기인족ectABC급기상하유조공서렬.DNAStar연건분석표명ectA、ectB화ectC위우동일개조종자상,대소분별위579 bp、1269 bp화390 bp,예측분별편마192、422화129개안기산적태련.동원성분석표명:Halomonas sp.QHL1 ectABC기인족소편마적이안기정산전을선기매(EctA)、이안기정산전안매(EctB)화사경밀정합성매(EctC)여Halomonas sp.Nj223 ectABC기인족소편마적매단백상사성분별체57%、96%화85%.이용분자극륭기술구건이안기정산전안매기인ectB적중조표체재체pET-28-ectB,통과한제성내절매매절화측서분석,결과표명기목적기인적삽입위치、대소화독마광균정학.유도표체중조균,SDS-PAGE분석,목적단백조대약46 kDa.
