山西农业大学学报（自然科学版）
山西農業大學學報（自然科學版）
산서농업대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SHANXI AGRICULTURAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2012年
6期
530-535
,共6页
范阔海%姜俊兵%于秀菊%尹伟%李宏全
範闊海%薑俊兵%于秀菊%尹偉%李宏全
범활해%강준병%우수국%윤위%리굉전
肽类抗生素%PR-39%密码子优化%毕赤酵母%抗菌活性
肽類抗生素%PR-39%密碼子優化%畢赤酵母%抗菌活性
태류항생소%PR-39%밀마자우화%필적효모%항균활성
PR-39通过非穿孔形式抑制DNA和蛋白质的合成,从而对革兰氏阴性菌和阳性菌具有抗菌活性.此外,在伤口修复、炎症、缺血再灌注损伤以及诱导血管生成等方面也发挥着重要的生物学功能,因此开发PR-39具有重大的意义.用人工合成的PR-39基因为模板,通过PCR扩增获得PR-39片段,将其克隆到载体pHIL-S1构建重组质粒pHIL-S1-PR-39,并电转化至毕赤酵母(Pichia pastoris) GS115中,用MD和MM平板筛选重组子,经甲醇诱导其表达后,Tricine-SDS-PAGE分析表达蛋白,通过琼脂扩散试验检测PR-39的抑菌活性.通过MD和MM平板筛选出Mut+的转化子,甲醇诱导表达产物经Tricine-SDS-PAGE得到大约4kD的重组蛋白,并能够抑制大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的生长.本研究获得了能高效稳定表达具有生物学活性的重组PR-39的基因工程菌,为抗菌肽工业化生产奠定了实验基础.
PR-39通過非穿孔形式抑製DNA和蛋白質的閤成,從而對革蘭氏陰性菌和暘性菌具有抗菌活性.此外,在傷口脩複、炎癥、缺血再灌註損傷以及誘導血管生成等方麵也髮揮著重要的生物學功能,因此開髮PR-39具有重大的意義.用人工閤成的PR-39基因為模闆,通過PCR擴增穫得PR-39片段,將其剋隆到載體pHIL-S1構建重組質粒pHIL-S1-PR-39,併電轉化至畢赤酵母(Pichia pastoris) GS115中,用MD和MM平闆篩選重組子,經甲醇誘導其錶達後,Tricine-SDS-PAGE分析錶達蛋白,通過瓊脂擴散試驗檢測PR-39的抑菌活性.通過MD和MM平闆篩選齣Mut+的轉化子,甲醇誘導錶達產物經Tricine-SDS-PAGE得到大約4kD的重組蛋白,併能夠抑製大腸桿菌、沙門氏菌和金黃色葡萄毬菌的生長.本研究穫得瞭能高效穩定錶達具有生物學活性的重組PR-39的基因工程菌,為抗菌肽工業化生產奠定瞭實驗基礎.
PR-39통과비천공형식억제DNA화단백질적합성,종이대혁란씨음성균화양성균구유항균활성.차외,재상구수복、염증、결혈재관주손상이급유도혈관생성등방면야발휘착중요적생물학공능,인차개발PR-39구유중대적의의.용인공합성적PR-39기인위모판,통과PCR확증획득PR-39편단,장기극륭도재체pHIL-S1구건중조질립pHIL-S1-PR-39,병전전화지필적효모(Pichia pastoris) GS115중,용MD화MM평판사선중조자,경갑순유도기표체후,Tricine-SDS-PAGE분석표체단백,통과경지확산시험검측PR-39적억균활성.통과MD화MM평판사선출Mut+적전화자,갑순유도표체산물경Tricine-SDS-PAGE득도대약4kD적중조단백,병능구억제대장간균、사문씨균화금황색포도구균적생장.본연구획득료능고효은정표체구유생물학활성적중조PR-39적기인공정균,위항균태공업화생산전정료실험기출.
