江苏农业科学
江囌農業科學
강소농업과학
JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES
2011年
1期
36-38
,共3页
徐兴利%金则新%李钧敏%祈彩虹
徐興利%金則新%李鈞敏%祈綵虹
서흥리%금칙신%리균민%기채홍
山鸡椒%ISSR%优化%遗传多样性
山鷄椒%ISSR%優化%遺傳多樣性
산계초%ISSR%우화%유전다양성
采用改进的SDS法提取山鸡椒基因组DNA,利用单因素试验对ISSR反应体系中的Mg<'2+>浓度、dNTP浓度、模板DNA用量、Taq DNA 聚合酶用量、BSA浓度、引物用量进行筛选和优化,得出了适用于山鸡椒ISSR分析的扩增条件:10μl PCR反应体积,1×Taq酶配套缓冲液(200 mmol/L Tris·HCl,pH值8.8,100 mmol/L KCl,1%Triton X-100,100 mmol/L(NH<,4>)<,2>SO<,4>,15 mmol/L MgCl<,2>),0.8 U Taq DNA聚合酶,16 ng模板DNA,6 pmol引物,0.3 mmol/L dNTP,1.75 mmol/L Mg<'2+>.利用优化反应体系从100个ISSR引物中筛选出12个重复性好、稳定性高的引物对21个山鸡椒个体的DNA进行扩增,共得到107个位点,其中,91个为多态位点,多态位点百分率为85.05%,Nei指数为0.361 3,Shannon信息指数为0.522 1,表明山鸡椒的遗传多样性处于较高水平.
採用改進的SDS法提取山鷄椒基因組DNA,利用單因素試驗對ISSR反應體繫中的Mg<'2+>濃度、dNTP濃度、模闆DNA用量、Taq DNA 聚閤酶用量、BSA濃度、引物用量進行篩選和優化,得齣瞭適用于山鷄椒ISSR分析的擴增條件:10μl PCR反應體積,1×Taq酶配套緩遲液(200 mmol/L Tris·HCl,pH值8.8,100 mmol/L KCl,1%Triton X-100,100 mmol/L(NH<,4>)<,2>SO<,4>,15 mmol/L MgCl<,2>),0.8 U Taq DNA聚閤酶,16 ng模闆DNA,6 pmol引物,0.3 mmol/L dNTP,1.75 mmol/L Mg<'2+>.利用優化反應體繫從100箇ISSR引物中篩選齣12箇重複性好、穩定性高的引物對21箇山鷄椒箇體的DNA進行擴增,共得到107箇位點,其中,91箇為多態位點,多態位點百分率為85.05%,Nei指數為0.361 3,Shannon信息指數為0.522 1,錶明山鷄椒的遺傳多樣性處于較高水平.
채용개진적SDS법제취산계초기인조DNA,이용단인소시험대ISSR반응체계중적Mg<'2+>농도、dNTP농도、모판DNA용량、Taq DNA 취합매용량、BSA농도、인물용량진행사선화우화,득출료괄용우산계초ISSR분석적확증조건:10μl PCR반응체적,1×Taq매배투완충액(200 mmol/L Tris·HCl,pH치8.8,100 mmol/L KCl,1%Triton X-100,100 mmol/L(NH<,4>)<,2>SO<,4>,15 mmol/L MgCl<,2>),0.8 U Taq DNA취합매,16 ng모판DNA,6 pmol인물,0.3 mmol/L dNTP,1.75 mmol/L Mg<'2+>.이용우화반응체계종100개ISSR인물중사선출12개중복성호、은정성고적인물대21개산계초개체적DNA진행확증,공득도107개위점,기중,91개위다태위점,다태위점백분솔위85.05%,Nei지수위0.361 3,Shannon신식지수위0.522 1,표명산계초적유전다양성처우교고수평.
