CAJ | 학술논문

旨为建立高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)野毒株持续性感染细胞模型.通过将HPPRRSV野毒株JX143感染Marc-145细胞,感染的细胞经连续传代35代,建立了稳定的PRRSV持续感染的细胞模型,获得了JX143-Marc-145-P35细胞株.应用RT-PCR、免疫荧光、空斑形态分析等技术跟踪观察了JX143-Marc145细胞株连续传代过程中病毒在细胞内的存在和生物学特性的变化.为了进一步分析病毒持续性感染过程中基因的特征性变化,通过RT-PCR扩增出JX143-Marc145-P35的全基因,并进行测序和序列分析.结果表明,在细胞模型建立的过程中,细胞病变(Cytopathic effect,CPE)的产生经历了从慢到快又到慢的过程,RT-PCR检测和免疫荧光证实JX143-Marc-145细胞中PRRSV持续稳定存在,表现出病毒持续感染的基本特征.该细胞与正常的Marc145细胞相比,细胞周期无显著差异,但JX143-Marc-145-P35的空斑形态与亲本病毒JX143相比略大.通过序列比较分析,JX143-Marc-145-P35v与亲本猪JX143的同源性为99.4％,存在38个非同义突变,其中,31个位于非结构蛋白,7个位于结构蛋白.试验成功建立了稳定的PRRSV持续性感染细胞模型,细胞周期与正常细胞无显著差异,但病毒在持续性感染过程中无论是基因还是表型都发生了变异,且在体外持续性感染建立的过程中,对于氨基酸突变的选择压力很可能施加于病毒的非结构蛋白和主要糖蛋白.该模型的建立对深入研究病毒与细胞间的相互作用,尤其是PRRSV持续性感染的机制具有重要意义.
지위건립고치병성저번식여호흡종합정병독(HP-PRRSV)야독주지속성감염세포모형.통과장HPPRRSV야독주JX143감염Marc-145세포,감염적세포경련속전대35대,건립료은정적PRRSV지속감염적세포모형,획득료JX143-Marc-145-P35세포주.응용RT-PCR、면역형광、공반형태분석등기술근종관찰료JX143-Marc145세포주련속전대과정중병독재세포내적존재화생물학특성적변화.위료진일보분석병독지속성감염과정중기인적특정성변화,통과RT-PCR확증출JX143-Marc145-P35적전기인,병진행측서화서렬분석.결과표명,재세포모형건립적과정중,세포병변(Cytopathic effect,CPE)적산생경력료종만도쾌우도만적과정,RT-PCR검측화면역형광증실JX143-Marc-145세포중PRRSV지속은정존재,표현출병독지속감염적기본특정.해세포여정상적Marc145세포상비,세포주기무현저차이,단JX143-Marc-145-P35적공반형태여친본병독JX143상비략대.통과서렬비교분석,JX143-Marc-145-P35v여친본저JX143적동원성위99.4％,존재38개비동의돌변,기중,31개위우비결구단백,7개위우결구단백.시험성공건립료은정적PRRSV지속성감염세포모형,세포주기여정상세포무현저차이,단병독재지속성감염과정중무론시기인환시표형도발생료변이,차재체외지속성감염건립적과정중,대우안기산돌변적선택압력흔가능시가우병독적비결구단백화주요당단백.해모형적건립대심입연구병독여세포간적상호작용,우기시PRRSV지속성감염적궤제구유중요의의.